酵母雙雜交系統的研究進展

Fields等人的工作標誌著雙雜交系統的正式建立。他們以與SUC2基因調控相關的兩個蛋白Snf1和Snf2為模型，將前者與Gal4的BD結構域融合，另壹個與Gal4的AD結構域的酸性區域融合。BD和AD形成的融合蛋白壹般分別稱為“誘餌”和“獵物或靶蛋白”。如果Snf1和Snf2之間存在相互作用，位於這兩個融合蛋白上的BD和AD可以重新形成活躍的轉錄激活因子，從而激活相應基因的轉錄和表達。這種可以顯示“誘餌”和“獵物”之間相互作用的被激活的基因被稱為報告基因。通過檢測報告基因的表達產物，可以依次判斷作為“誘餌”和“獵物”的兩種蛋白質之間是否存在相互作用。這裏，Fields等人采用編碼β-半乳糖苷酶的LacZ作為報告基因，將Gal4蛋白調控的GAL1序列引入該基因的上遊調控區。將修飾的LacZ基因整合到酵母染色體URA3中。但酵母中的GAL4基因和GAL80基因(Gal80是Gal4的負調控因子)被刪除，從而排除了細胞內內源性調控因子的影響。已知Snf1和Snf2之間存在相互作用。結果表明，只有用Snf1和Snf2融合表達載體轉化的酵母細胞具有β-半乳糖苷酶活性，單獨轉化任壹載體都不能檢測到β-半乳糖苷酶活性。