在微波爐中加熱煮沸3次,直到瓊脂糖完全熔化,搖勻,得到1.0%瓊脂糖凝膠溶液。
2.膠片準備:取電泳槽中的有機玻璃內槽(制膠槽),清洗幹凈,晾幹,放入制膠玻璃板中。用透明膠帶密封玻璃板和內槽兩端的邊緣,形成模具。
將內罐放在水平位置,將梳子放在固定位置,將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠溶液混合,小心地倒入內罐中的玻璃板中,使膠液慢慢散開,直到在整個玻璃板表面形成均勻的膠層。
3.室溫靜置至凝膠完全固化,輕輕垂直拉動梳子,取下膠帶,將凝膠和內槽放入電泳槽中。加入1×TAE電泳緩沖液,直至不通過橡膠板。
擴展數據:
電泳原理
電泳是在電泳塗裝的陽極和陰極施加電壓的作用下,帶電的塗裝離子向陰極移動,與陰極表面產生的堿性物質反應形成不溶物,沈積在工件表面。
它包括四個過程:
1.電解
(分解)開始時,陰極反應是電解反應,產生氫氣和氫氧根離子OH。該反應導致在陰極表面形成高堿性邊界層。當陽離子與羥基反應生成不溶於水的物質時,就被包覆沈積。方程式是:H2O → OH+H
2.電泳
(遷移)陽離子樹脂和H+在電場作用下向陰極移動,陰離子向陽極移動的過程。
3.【化學】電鍍
(沈澱)在塗覆的工件表面上,陽離子樹脂以堿性方式與陰極表面反應,中和並沈澱no沈積物,並在塗覆的工件上沈積。
4.電滲透
(脫水)工件表面的塗層固體和塗膜是半透明的,有許多毛細孔。水從陰極塗膜中排出,使塗膜在電場作用下脫水,塗膜吸附在工件表面,從而完成整個電泳過程。
基本原理
生物大分子,如蛋白質、核酸和多糖,具有陽離子和陰離子基團,稱為兩性離子。粒子往往分散在溶液中,它們的靜電荷取決於介質的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中,帶電粒子向陰極或陽極遷移,遷移方向取決於其帶電符號。這種遷移現象被稱為電泳。
如果將生物大分子的膠體溶液置於無擾動的電場中,使粒子具有恒定遷移率的驅動力來自於粒子上的有效電荷Q和電勢梯度E。它們與介質的摩擦阻力f競爭。在自由解中,這種競爭服從斯托克斯定律。
其中v是半徑為r的粒子在粘度為η的介質中的移動速度。但在凝膠中,這種競爭並不完全符合斯托克斯定律。f取決於介質中的其他因素,如凝膠厚度、顆粒大小甚至介質的滲透。
電泳遷移率m被定義為在電勢梯度e的影響下粒子在時間t內的遷移距離d
淌度的差異為從混合物中分離物質提供了依據,遷移距離與淌度成正比。
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