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瓊脂糖凝膠電泳分析

分離的程度取決於妳實驗的需要。如果妳的標記相鄰兩條帶的差異是100bp,而妳的樣本的陽性結果和帶有壹個內含子的假陽性結果的差異只有50bp(比如妳在做壹個逆轉錄PCR實驗),那麽妳當然需要區分清楚。否則,您只需要清楚地看到您的樣品帶位於這兩個標記帶之間。

想分開它與膠水的厚度和取樣無關。增加瓊脂糖的濃度確實有影響,但不是線性關系。瓊脂糖的濃度決定了哪個大小範圍是最開放的,並且不是所有的帶都被分離到相同的程度。唉,看看輪渡百科。

“2、瓊脂糖濃度

給定大小的線性DNA分子在不同濃度的瓊脂糖凝膠中的遷移速度是不同的。DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度呈線性關系。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。分離小於0.5kb的DNA片段所需的凝膠濃度為1.2-1.5%,分離大於10kb的DNA分子所需的凝膠濃度為0.3-0.7%,對於大小介於兩者之間的DNA片段,凝膠濃度為0.8-1.0%。"

瓊脂糖的濃度選定後,跑的時間越長,分開的距離越大。

電泳開始時使用低電壓有利於清晰的條帶,因為樣品中的分子在取樣後是隨機排列的,施加電壓後它們是按統壹的方向排列的。所以短時間的低壓會讓它們都排好隊,然後轉高壓同時啟動。否則就像有些在起跑線上的人背對著終點,結果就是壹聲槍響。同樣速度的人跑出不同的結果——同樣大小的分子跑出壹條嚴格的線,這條線當然不是完美的。

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哇,不好意思和蛋白質電泳搞混了。其實壹般不用放下壓力,尤其是只跑30分鐘。但是妳的電壓比我的高多了。我壹般是100V運行45分鐘,但是電壓和膠水的大小有關。只要結果沒問題,就不要隨意改變實驗條件。