pca培養基第二天用幾度

4 ℃保存，平板計數瓊脂（Plate Count Agar）簡稱PCA，是非選擇性固體培養基，用於食品、化妝品和飲 用水中微生物計數。 本培養基配方采用標準法配方。 平板計數瓊脂(PCA)原理： 胰蛋白腖提供有機氮源和遊離氨基酸，酵母提取物提供生長因子，葡萄糖作為能量物質。平板計數瓊脂培 養基中的營養成分能夠支持牛奶及飲用水中絕大多數微生物的生長。 組成成分(g/L)： 胰蛋白腖 5.0 酵母提取物 2.5 葡萄糖 1.0 瓊脂 15.0 pH 7.0± 0.2 配制方法： 1. 稱取以上組分，或者直接稱取本公司的平板計數瓊脂培養基23.5g 本品，用1000ml去離子水重懸，加熱攪拌使其全部溶解。 2. 平板計數瓊脂培養基的滅菌溫度是：121°C高溫滅菌15min。 3. 待冷卻至55°C時倒20ml培養基到90mm無菌培養皿中。 4. 對於酵母和黴菌含量高的樣品，則用100mm培養皿，每個培養皿倒入20-25ml培養基。 待瓊脂表面幹燥後使用。 本產品僅供科研使用，請勿用於醫藥，不能用於臨床治療診斷使用！ 平板計數瓊脂使用方法（平板計數法、大腸菌群平板計數法、菌落總數平板計數法） 方法壹 菌落計數總數之稀釋倒平板法 此方法是2010年版國家標準 GB 4789.2-2010中的菌落總數計數方法。 1、稱取平板計數瓊脂23.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，滅菌完成後，將獲得的平板計數瓊脂培養基置於45度水浴中備用。 2、樣品的稀釋及處理。取樣品25g或者25ml，溶解於225ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，然後使得樣品充分溶解和混勻。此時的樣品濃度是稀釋了原樣品10倍。 3、10倍梯度稀釋樣品液。取樣品溶解液1 ml，加入9ml 無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，吹打均勻，此時的溶液樣品濃度是原始樣品的0.01倍。每次吸取上壹個樣品1 ml，加入到9ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，根據這個方法繼續進行樣品的連續梯度稀釋。 4、 選擇2-3個合適的稀釋度，吸取該稀釋度的1 ml稀釋液於無菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。 5、稀釋液移入平皿後，及時將涼至45-50 ℃的瓊脂培養基(可放置於45℃水浴箱保溫) 註入平皿約15-25 mL，並轉動平皿使菌液稀釋液和瓊脂培養基混合均勻。同時將瓊脂 培養基傾入加有1 mL無菌生理鹽水或者磷酸鹽緩沖液的滅菌平皿內作空白對照。 6、待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養48±2h。 7、觀察結果並進行計數。30-300個菌落為合適範圍，出具菌落總數計數報告。 方法二：菌落總數計數平板塗布法 1、稱取平板計數瓊脂23.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。 2、待冷卻至55°C時倒20ml培養基到90mm無菌培養皿中，冷卻後成為可以使用的平板計數平板，待表面幹燥後使用。對於酵母和黴菌含量高的樣品，則用100mm培養皿，每個培養皿倒入20-25ml培養基。 待瓊脂表面幹燥後使用。 3、樣品的稀釋及處理。取樣品25g或者25ml，溶解於225ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，然後使得樣品充分溶解和混勻。此時的樣品濃度是稀釋了原樣品10倍。 4、10倍梯度稀釋樣品液。取樣品溶解液1 ml，加入9ml 無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，吹打均勻，此時的溶液樣品濃度是原始樣品的0.01倍。每次吸取上壹個樣品1 ml，加入到9ml無菌生理鹽水或者無菌磷酸鹽緩沖液中，根據這個方法繼續進行樣品的連續梯度稀釋。 5、 選擇2-3個合適的稀釋度，吸取該稀釋度的0. 1 ml或者0.2 ml稀釋液於倒好的計數平板中，每個稀釋度做兩個瓊脂平板。 6、使用無菌的玻棒或者其他無菌塗布物品，將稀釋液在平板上塗布均勻。 7、將平板置於36±1℃溫箱內培養48±2h。 8、觀察結果並進行計數。30-300個菌落為合適範圍。出具菌落總數計數報告。