澱粉酶活力測定具體步驟如下:
壹、材料、儀器設備及試劑
1、材料:萌發的小麥種子(芽長約1cm)。
2、儀器設備:分光光度計;離心機;恒溫水浴;具塞刻度試管;刻度吸管;容量瓶。
3、試劑(均為分析純)
標準麥芽糖溶液;3.5-二硝基水楊酸試劑;01mol/LpH5.6的檸檬酸緩沖液和1%澱粉溶液。
二、實驗步驟
1、麥芽糖標準曲線的制作:取7支幹凈的具塞刻度試管,編號,按表加入試劑。搖勻,置沸水浴中煮沸5min。取出後流水冷卻,加蒸餾水定容至20ml。以1號管作為空白調零點,在540nm波長下比色測定。以麥芽糖含量為橫座標,吸光度值為縱座標,繪制標準曲線。
2、酶液制備:稱取1g萌發3天的小麥種子,置於研缽中,加少量石英砂和2ml蒸餾水,研磨成勻漿。將勻漿倒入離心管中,用6ml蒸餾水分次將殘渣洗入離心管。
提取液在室溫下放置提取15~20min,每隔數min攪動1次,使其充分提取。然後在3000rpm下離心10min,將上清液倒入100ml容量瓶中,加蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶原液。
吸取上述澱粉酶原液10ml,放入50ml容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶稀釋液。
3、酶活力的測定:取6支幹凈的具塞刻度試管,編號,按表進行操作。
4、結果計算:澱粉酶活力=C×VT/(W×Vs×T)(mg/g/min)。