1.實驗方法:
質譜分析:質譜(MS)是確定蛋白質糖基化位點的黃金標準。通過對特定肽段的MS/MS分析,可以鑒定出糖基化的特定位點。
免疫印跡:使用特定於糖基化位點的抗體進行檢測。
2.生物信息學預測:
預測軟件和數據庫:如NetNGlyc(預測N-糖基化位點),NetOGlyc(預測O-糖基化位點),GlycoEP等。
使用這些工具的步驟通常包括:輸入目標蛋白質的氨基酸序列;選擇糖基化類型(N-或O-糖基化);運行預測,得到潛在的糖基化位點;評估預測結果,通常這些工具會給出壹個置信度得分。
二、糖基化後分子量的預測:
1.理論計算:
知道了糖基化位點及其類型後,可以根據添加的糖鏈的類型和數量估算分子量的變化。
2.質譜測定:
糖基化蛋白質的整體分子量可以通過質譜直接測定。糖基化引起的質量變化可以通過分析糖基化和未糖基化形式的峰值差異來確定。