1,PCR產物本身:
PCR的非特異性產物太多,往往是酶太多或酶質量不好,dNTP濃度太高,Mg2+濃度太高,退火溫度太低,循環次數太多造成的。
對策:①減少Taq酶的用量,或者換其他來源的酶;②降低dNTP的濃度;③適當降低Mg2+的濃度;④增加模板量,減少引物量,減少循環次數,提高退火溫度。
2.電泳系統的問題:
(1)電泳緩沖液TAE或TBE被汙染,建議更換緩沖液。(2)上樣時樣品上浮,建議增加上樣緩沖液的量,小心添加樣品。(3)電壓過高。(4)適當增加妳的凝膠濃度。(取決於妳的碎片大小)(5)觀察妳的標記是否有拖尾現象。
這個問題很多人都問過,借用上壹個問題的最佳答案。