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瓊脂糖電泳的優缺點是什麽?

瓊脂糖凝膠電泳是壹種以瓊脂或瓊脂糖為支持介質的電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等。大孔徑的瓊脂糖凝膠壹般可用於電泳分離。

瓊脂糖凝膠可以區分相差約100bp的DNA片段。雖然其分辨率低於聚丙烯酰胺凝膠,但易於制備,分離範圍廣,特別適合分離DNA的大片段。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的範圍為0.2-20kb,脈沖電泳可分離高達10 7bp的DNA片段。

瓊脂糖凝膠的特性

天然瓊脂(瓊脂)是壹種多糖,主要由瓊脂糖(約80%)和瓊脂凝膠組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物組成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂凝膠是含有硫酸根和羧基的強酸性多糖。因為這些基團是帶電荷的,在電場的作用下可以產生很強的電滲作用,硫酸根可以和壹些蛋白質相互作用,從而影響電泳速度和分離效果。因此,目前瓊脂糖被廣泛用作平板電泳的電泳支持物,其優點如下。

(1)瓊脂糖凝膠電泳簡單快速,樣品無需預處理即可電泳。

(2)瓊脂糖凝膠結構均勻,含水量高(約98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散電流相對自由,對樣品的吸附最小,因此電泳圖譜清晰,分辨率高,重復性好。

(3)瓊脂糖透明,無紫外吸收,電泳過程和結果可用紫外燈直接檢測和定量測定。

(4)電泳後區帶易染色,樣品易洗脫,便於定量測定。制備幹膜可以長期保存。

目前,瓊脂糖常用作分離蛋白質和同工酶的電泳支持物。將瓊脂糖電泳與免疫化學相結合,發展了壹種免疫電泳技術,它可以識別用其他方法不能識別的復雜系統。由於超微技術的建立,可以檢測0.1ug的蛋白質。

瓊脂糖凝膠電泳也常用於分離和鑒定核酸,如DNA鑒定和DNA限制性內切酶作圖。該方法操作方便、設備簡單、樣本量小、分辨率高,已成為基因工程研究中常用的實驗方法之壹。