用什麽方法測定纖維素酶活性？

纖維素酶活性的測定。目的學習和掌握3，5-二硝基水楊酸(DNS)法測定纖維素酶活性的原理和方法，了解纖維素酶的作用特點。二、纖維素酶的原理是多組分酶，包括C1酶、CX酶和？0?7?0?β-葡萄糖苷酶的三個主要成分。其中，C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素，CX酶的作用是決定無定形纖維的酶活… 3。C1的酶活測定，用於測定5mg/mL的原酶液經10 ~ 15倍稀釋後的C1的酶活，以脫脂棉為底物。取4支洗凈幹燥的20mL帶塞校準試管，編號，加入50mg脫脂棉，加入1.5ml 0.05 mph 5.0檸檬酸緩沖液，加入1.5mL DNS溶液至試管1滅活酶活性，作為空白對照，根據顏色調整用量。同時，將四支試管在45℃水浴中預熱5 ~ 10 min，然後加入0.5mL適當稀釋的酶溶液，在45℃水浴中保溫24小時。取出後立即在2號、3號、4號試管中分別加入1.5mL DNS溶液，終止酶反應，搖勻，然後沸水浴5分鐘，取出冷卻，再用蒸餾水定容至20mL，混勻。以1號試管溶液為空白對照，在波長540nm處測定2號、3號、4號試管溶液的光密度值，記錄結果。根據三次重復光密度的平均值，在標準曲線上找到相應的葡萄糖含量，按照下式計算C1的酶活(U/g)。在上述條件下，1？0?7?0?0摩爾葡萄糖所需的酶量定義為壹個活性單位(U)。其中:24是酶活性定義中的24h。4.CX酶活性測定:將5mg/mL膠原酶溶液稀釋5倍，以CMC為底物，測定CX酶活性。取4支洗凈幹燥的20mL帶塞校準試管，編號後分別加入1.5ml 0.51% CMC+0% CMC檸檬酸緩沖液，在試管1中加入1.5 ml DNS溶液使酶活性失活，作為空白對照，將顏色調至微黃。將4支試管同時在50℃水浴中預熱5 ~ 10 min，然後加入稀釋5倍的酶溶液0.5mL，在50℃水浴中保溫30min後取出，立即向2號、3號、4號試管中加入1.5ml DNS溶液以終止酶反應，充分搖勻後取出冷卻，再用蒸餾水定容至20mL。以1號試管溶液為空白對照，在波長540nm處測定2號、3號、4號試管溶液的光密度值，記錄結果。根據三次重復光密度的平均值，在標準曲線上找到相應的葡萄糖含量，根據下式計算CX酶活性(U/g)。在上述條件下，1？0?7?0?0摩爾葡萄糖所需的酶量定義為壹個活性單位(U)。5.？0?7?0?0-葡萄糖苷酶活性的測定取4支洗凈幹燥的20mL帶塞校準試管，編號後分別加入1.5mL 0.5%%水楊酸檸檬酸鹽緩沖液，向1試管中加入1.5 ml DNS溶液使酶活性失活，作為空白對照，根據比色時間調整用量。將四支試管同時在50℃水浴中預熱5 ~ 10 min，然後分別加入0.5mL酶溶液，在50℃水浴中保溫30min。取出後立即在2號、3號、4號試管中分別加入1.5ml DNS溶液，終止酶反應，充分搖勻，然後沸水浴5min，取出，冷卻，用蒸餾水定容至20mL，充分混勻。以1號試管溶液為空白對照，在波長540nm處測定2號、3號、4號試管溶液的光密度值，記錄結果。根據三次重復光密度的平均值，在標準曲線上找出對應的葡萄糖含量，按下式計算？0?7?0?β-葡萄糖苷酶活性(U/g)。在上述條件下，1？0?7?0?0摩爾葡萄糖所需的酶量定義為壹個活性單位(U)。五、成績計算1。葡萄糖(G)標準曲線的制備(表2)表2標準曲線測定數據列表