瓊脂糖凝膠電泳拖尾了怎麽辦？

跑過瓊脂糖凝膠電泳的小夥伴，是不是經常遇到過電泳拖尾的現象啊？相信不少人點頭如搗蒜了。提個質粒拖尾，提個DNA拖尾，連PCR也拖尾，拖尾什麽的最常見了。驗證也就算了，關鍵是圖片拍出來不好看了，發文章什麽的太影響檔次了。下面我就跟據自己的經驗跟大家講講瓊脂糖凝膠電泳為什麽會拖尾，有不足的希望大家多多評論補足啊（三人行必有我師嘛）！！

那瓊脂糖凝膠電泳為什麽會拖尾呢？

1.PCR產物出現拖尾的因素有很多，總結為壹條，就是非特異性擴增過多。原因可能是：

（1）模板不純：純化模板

（2）Buffer不合適：更換Buffer

（3）退火溫度偏低：適當提高退火溫度

（4）酶量過多：適量用酶，或調換另壹種酶

（5）dNTP、Mg2+濃度偏高：適當降低dNTP和鎂離子的濃度

（6）循環次數過多：減少循環次數

（7）模板量少或引物量過多：增加模板量，減少引物的用量

2.提質粒的時候經常有這種個現象，有可能是樣品濃度過高了。這種情況簡單，稀釋壹下就行了。

3.提基因組DNA的時候也常出現拖尾，最可能的就是提的DNA中摻雜有蛋白質，蛋白質會拽DNA的泳動。所以壹定要註意提取基因的操作，減少蛋白質等雜質的出現。

4.樣品破碎或是被降解

5.存在RNA：DNA前面的壹片壹般都是未清除的RNA，經過純化，RNAse處理，就沒有了

6.電泳體系的問題：觀察妳的marker是否也存在拖尾現象，作為對照

（1）電泳緩沖液TAE或者TBE的汙染：。建議更換緩沖液。

（2）上樣時樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。

（3）電壓太高：適當降低電壓

（4）根據核酸片斷大小，適當把加大凝膠濃度。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。分離小於0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,

分離大於10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間於兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。/s/QZbboqNBDce2QFPD8JxFCw