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從酵母雙文文庫中篩選相互作用蛋白,然後怎麽辦?

然後用酵母雙雜交技術檢測特定蛋白質對之間的相互作用。

例如:

1,誘餌蛋白表達載體和獵物蛋白表達載體的構建

2.表達載體轉化酵母的驗證、自激活活性和毒性檢測。

3.誘餌蛋白顆粒和獵物蛋白顆粒轉化酵母的驗證及其相互作用的試驗報告。

4.無相互作用時誘餌和獵物蛋白質表達的蛋白質印跡檢測。

酵母雙雜交技術的優勢:

①效率高:轉換方法簡單,轉換效率高,操作方便。

②靈敏度:可以檢測蛋白質之間的微弱相互作用。

③現實:酵母細胞是真核細胞,融合蛋白之間的相互作用是在真核細胞的細胞核內進行的。大部分蛋白質在翻譯後能夠保持蛋白質的自然空間構象和折疊狀態,接近其真實的生理狀態,在壹定程度上能夠代表其在細胞中的真實情況。

④簡單性:只需構建誘餌表達載體,省去了蛋白質提取純化或抗體制備的繁瑣步驟。