1 儀器與試藥 HP 1100型高效液相色譜儀；α-細辛腦對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：10298-0001）；β- 細辛腦對照品（美國Sigema公司）；α-細辛腦原料（湖北省天門天義藥業有限公司，批號;20040501， 20040502，20040601）；註射用細辛腦（武漢海特生物制藥股份有限公司，規格為：8 mg,批號： 20040501，20040502，20040601）；細辛腦註射液（湖北天藥藥業有限公司，規格為2 ml; 8 mg,批號： 20041010,20041011，20041012）；甲醇（色譜純，CAS 67-56-1 TEDIA COMPANY，ING USA）。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 wm）；流動相：甲醇-水（70: 30）；流速1.0 ml·min-1；檢測波長：258 nm；柱溫；25℃。
2.2 線性關系和最低檢出量
精密稱取α-細辛腦對照品25 mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻。精密量取 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml分別至25 ml量瓶中，用流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，進樣量均為20μl，進行色譜分析。以濃度C（μg·ml-1）對峰面積A經線性回歸，C＝1.38×10-5A+0.45，r=0.9998，試驗結果表明，當α-細辛腦濃度在20～100μg·ml-1範圍內，與峰面積呈良好的線性關系。在本文色譜條件下，當噪信比為3:1時，測得最低檢出量0.48 ng。
2.3 回收率試驗
精密稱取已知含量的同壹批號原料樣品5份，分別精密加入α-細辛腦對照品5 mg,按樣品測定項下方法測定，計算回歸率。結果見表1。
表1 加樣回收率試驗
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樣品中含量 加入量 測得量 回收率 平均回收率 RSD
(mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
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5.07 5.02 10.11 100.32
5.05 5.02 10.05 99.56
5.02 5.02 10.01 99.40 99.81 0.43
5.03 5.02 10.04 99.82
5.01 5.02 10.03 100.12
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2.4 精密度試驗
取對照品溶液，濃度為50.2μg·ml-1，進樣量均為20μl，重復測定5次，α-細辛腦色譜峰面積均值為1 027, RSD為0.6％（n＝5）。
2.5 穩定性試驗
取濃度為50.2 μg·ml-1的對照品溶液，在1,2， 4，6，8h分別進樣，進樣量均為20μl，測定峰面積 RSD為1.0%，表明α-細辛腦溶液在8h內穩定。
2.6 重復性
按樣品測定項下方法，對同壹批號的樣品，分別取樣5份，進樣，測定含量，RSD=0.4%（n＝5）。
2.7 樣品測定
精密稱取（或量取）適量（約相當於α-細辛腦 25 mg），置100 ml量瓶中，加流動相適量，充分振搖，使溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml置25 ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取α-細辛腦約25 mg,置100ml量瓶中，加流動相使溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml置 25 ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按上述色譜條件測定，進樣量均為20μl，用外標法計算其含量，見表2;色譜圖見圖1。
表2 樣品含量測定結果（制劑為標示量）
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生產廠家 劑型 批號 本法 紫外法
(%) (%)
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湖北省天門天義
藥業有限公司 α-細辛腦原料 20040501 100.2 101.4
20040502 99.9 101.1
20040601 100.3 101.6
武漢海特生物
制藥股份公司 註射用α-細辛腦 20040906 100.6 101.2
20040908 98.8 100.3
20040910 99.8 101.2
湖北天藥藥業
股份公司 α-細辛腦註射劑 20041010 99.5 99.9
20041011 99.1 99.5
20041012 99.2 99.1
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a.α-細辛腦對照品 b.樣品 c.空白對照 圖1 HPLC色譜圖
3 討論
3.1 國家藥品標準
化學藥品地方標準上升國家標準第五冊α-細辛腦采用紫外方法，原料和制劑分別在258 nm波長和313 nm波長處測定，此方法波長不統壹，而且β- 細辛腦在此處也有吸收，此方法專屬性較差，采用本法測定時，測定結果準確。
3.2 測定波長的選擇
α-細辛腦經流動相溶解，為確定較為合適的檢測波長，在200～400 nm處掃描，在此範圍內α-細辛腦有兩個最大吸收波長，分別在258 nm，313 nm，檢測樣品時，在258 nm波長處對雜質檢測較靈敏，所以選擇258 nm為檢測波長。
3.3 流動相選擇
對於流動相的選擇主要是甲醇與乙腈的比較，實驗結果見表3。
表3 流動相比例的選擇
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20:80 60:40 70:30 80:20
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甲醇-水 25 min內不 18 min出峰 12 min出峰 5 min出峰
出峰 αβ分離度 αβ分離度 αβ無法分
較好 較好 開
乙腈-水 25 min內不 22 min出峰 14 min出峰 5 min出峰
出峰 αβ分離度 αβ分離度 αβ無法分
較好 較好 開
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從上面結果可知，70:30這壹比例效果較好，出峰時間早，而且β-細辛腦峰與主峰分離較好。從經濟價值看，甲醇比乙腈便宜，所以流動相選甲醇-水（70:30）。
3.4 主要雜質分離
α-細辛腦中主要雜質是β-細辛腦，2.4.5-三甲氧基苯，2.4.5-三甲氧基苯丙酮，在此系統中均能較好的分離，而且用此方法檢查有關物質均能達到較好的分離效果。