靈芝多糖提取

(1)材料

⒈菌株:韓國靈芝母種，由湖南省食用菌研究所提供。

2.種子培養基:2%玉米粉和2%米粉。

蔗糖2%磷酸二氫鉀o.1g

0.05%的硫酸鎂是天然的ph值。

3.發酵培養基:麥麩提取物10%葡萄糖2%。

硫酸銨0.2%

磷酸二氫鉀0.2%的ph值是自然的。

(2)方法1。種子培養:

1.發酵和培養產生菌絲體。

3.幹菌絲體和濕菌絲體的測定。

將發酵液離心，然後取其沈澱物，加入60%蔗糖，進行高速(3,000 rpm)密度梯度離心5分鐘，取上層菌絲體，將蔗糖洗凈，然後壓幹，得到濕菌，再將濕菌高溫幹燥，得到幹菌。分別稱壹下。

2.多糖提取。

菌絲體的預處理。取適量靈芝濕菌絲體，用乙醇等有機溶劑處理，去除濕菌絲體中的脂類物質，同時使糖苷酶失活，防止多糖降解。

⑵熱水提取多糖。取預處理後的靈芝濕菌體，放入1: 20的熱水(95℃)中，連續浸提3次。合並3次水提液，減壓濃縮至壹定體積，然後與3倍體積的95%乙醇混合，靜置10-12小時，然後離心。這種沈澱是粗多糖，混有蛋白質、色素、低聚糖等小分子雜質，壹般需要提純。

⑶多糖、蛋白質和deae纖維素柱層析純化。Sevag法壹般用於去蛋白:將0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合，振蕩半小時進行分離，直至氯仿與水的界面無沈澱，反復處理2-3次即可有效去除多糖中的蛋白。多糖的純化壹般采用硼酸deae纖維素柱層析:脫蛋白後的多糖分別用0.025mol/l、0.1mol/l硼砂和0.1mol/l氫氧化鈉溶液洗脫，然後用0.2%硫酸銅溶液測定吸光度，收集含多糖的洗脫液，濃縮脫鹽後得到所需多糖。

⑷多糖純度的鑒定。

可以通過電泳鑒定，如果有單壹條帶，就是純多糖。

多糖和多糖中蛋白質的⒌測定:

取壹定量菌絲體粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag法脫蛋白，用考馬斯亮藍法測定粗多糖中蛋白質和多糖的含量。結果表明，菌絲體中粗多糖含量為17.01%，多糖含量為5.43%，蛋白質含量為2.16%。

靈芝子實體多糖的提取

(1)材料1。菌株:韓國靈芝栽培種。

4.子實體栽培的生產原料:木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，

石膏1%，自然ph值。

(2)方法

1.子實體的培養。

4.靈芝子實體的預處理。

3.子實體多糖的提取。

取靈芝子實體適量，搗成粉末，過80目篩，再用熱水浸提法提取。具體操作同菌絲體多糖的提取。提取的粗多糖含有色素、蛋白質等小分子雜質，也要去除。

4.去除蛋白質和色素。

硒陰性法也用於去除子實體粗多糖中的蛋白質。目前還沒有找到理想的去除色素的方法。壹般用乙醇反復沖洗，效果並不理想。

多糖純度的⒌鑒定。

同壹菌絲體多糖純度的鑒定。

6.子實體中粗多糖、多糖和蛋白質含量的測定。

具體方法同菌絲體中多糖和蛋白質的測定。子實體中粗多糖含量為7.5%，多糖1.5%，蛋白質0.6%，均低於菌絲體。可見靈芝多糖的有效成分是在菌絲體階段形成的，這為靈芝深層發酵生產菌絲體提供了科學依據。