高效液相色譜法測定茶葉中黃曲黴毒素B1的方法
1.適用範圍本方法適用於出口茶葉中黃曲黴毒素B1的測定。
2.原理概述樣品用氯仿提取，提取液用矽膠柱凈化。凈化後的提取液用三氟乙酸衍生，用帶熒光檢測器的高效液相色譜法測定，外標法定量。
3.主要試劑和儀器3.1。主要試劑氯仿；正己烷；苯；甲醇:紫外光譜水平；乙腈:紫外光譜級；三氟乙酸；乙腈-水溶液(1+1)；氯仿-甲醇溶液(95+5)；苯-乙腈溶液(98+2)；黃曲黴毒素B1標準:純度≥99%；黃曲黴毒素B1標準溶液:準確稱取適量黃曲黴毒素B1標準溶液，將苯-乙腈溶液置於棕色容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的標準儲備溶液。根據需要，配制適當濃度的標準工作溶液。3.2.儀器高效液相色譜儀，配備熒光檢測器；天津恒奧矽膠柱；天津恒奧振蕩器:HMS系列；天津恒奧超聲波:HU、HS系列；
天津恒奧氮氣鼓風機；天津恒奧濾膜:有機體系，0.45微米；天津恒奧微孔濾膜過濾器
旋轉蒸發器；微型註射器；離心管:5mL，帶塞磨口；粉碎機。
4.樣品的取樣和制備4.1。抽樣方法從整個產品垛的上下部分隨機抽取2.2規定的件數，逐個打開。分別倒出塑料布上的所有茶葉，用取樣鏟從每片中取出約500克有代表性的樣品。將樣品充分混合，用四分法或取樣器逐漸分成500g，放入潔凈密封的樣品管中，密封，做好標記，及時送至實驗室。4.2.樣品制備:將所有取回的樣品研磨，過20目篩，混合均勻，分成兩份樣品，裝入幹凈的容器中，密封並做好標記。4.3.樣品保存:將樣品保存在室溫下。註:在取樣和制樣過程中，要防止樣品被汙染或殘留物含量發生變化。更多與質量檢驗、分析測試、化學計量學、標準物質相關的技術數據，請參考《中國藥品檢驗所標準物質目錄》，藥物標準物質參考/plist _ 3/plist _ 3 _ 0 _ 1 . html。
5.流程描述5.1。萃取稱取樣品5.0g(精確至0.1g)，置於100mL帶塞錐形瓶中，加入15mL氯仿，在振蕩器上萃取30分鐘，然後用玻璃纖維漏鬥過濾。將濾液收集在旋轉蒸發儀中帶尾管的圓底燒瓶中，用氯仿洗滌濾渣，收集濾液至約20mL。5.2.純化上述濾液用旋轉蒸發儀在50℃水浴中濃縮至約65438±0ml，用0.45μm濾膜過濾，註入矽膠柱。用2 ~ 4 ml正己烷清洗燒瓶，然後沖洗色譜柱，並丟棄流出液。然後用3 ~ 4 ml氯仿-甲醇溶液以每秒2滴的流速洗脫，收集離心管中的洗脫液。用氮氣儀慢慢吹幹，進行衍生化。5.3.求導5.3.1。向上述離心管中加入200μL正己烷和50μL三氟乙酸，蓋緊研磨塞，超聲振蕩65438±0min，靜置65438±00min，用氮氣吹幹。用乙腈-水溶液(1+1)定容至1.0mL，用超聲波1min，濾液用0.5μm濾膜過濾，濾液用於液相色譜。5.3.2.取1.0mL標準工作液作為標準工作液，用氮氣吹幹，按5.3.1步驟操作。5.4.5.4.1的測定。色譜條件柱:NOVA PAKc18，300mm×3.9mm(內徑)；流動相:甲醇-水溶液(42+58)；流速:0.8毫升/分鐘；熒光檢測器:激發波長375 nm，發射波長425nm；；色譜柱溫度:室溫。5.4.2.測定根據樣品溶液中黃曲黴毒素B1的含量，選擇峰高相近的標準工作溶液。黃曲黴毒素B1衍生物在標準工作溶液和樣品溶液中的響應值應在儀器檢測的線性範圍內。將標準工作溶液和樣品溶液的衍生溶液等體積插入樣品中進行測定。在上述色譜條件下，黃曲黴毒素B1衍生物的保留時間約為8min。5.4.3.除不加樣品外，空白試驗按上述測定步驟進行。
6.計算結果由色譜數據處理器處理。
7.下限和回收率的測定為7.1。該方法的下限為0.001mg/kg。7.2.回收率實驗數據:黃曲黴毒素B1添加濃度在0.001 ~ 0.5 mg/kg範圍內，回收率為89.1% ~ 104.9%。