蛋白腖1g
氯化鈉0.5克
瓊脂2g
自來水100毫升
PH 7.0~7.2滅菌1.05kg/cm2 22min。
具體準備步驟
1.稱
按照培養基配方比例依次準確稱取牛肉膏、蛋白腖和NaCl，放入燒杯中。牛肉醬壹般是挑玻璃棒，在小燒杯或表面皿裏稱重，用熱水融化後倒入燒杯裏。也可以放在稱重紙上，稱重後直接放入水中。這時候稍微加熱壹下，牛肉醬就會和稱重紙分離，然後馬上把紙拿出來。蛋白腖易吸潮，要快速稱重。另外，稱量藥物時，註意不要混用藥物。壹種藥物用牛角勺，或者稱完壹種藥物後，洗凈晾幹，再稱另壹種藥物。不要蓋錯瓶蓋。
融化
在燒杯中，可以先加入比需要量少的水，用玻璃棒攪拌，然後在石棉網上加熱使其溶解。藥物完全溶解後，加水至所需的總體積。如果制備固體培養基，將稱量的瓊脂放入溶解的藥物中，然後加熱使其融化。在瓊脂融化的過程中，需要不斷攪拌，防止燒杯在瓊脂糊底部破裂。最後，把失去的水補回來。
調節pH值
在調節pH值之前，用精密pH試紙測量培養基的原始pH值。若pH呈酸性，用滴管將1mol/L NaOH逐滴加入培養基中，邊加邊攪拌，隨時用pH試紙測pH值，直至pH達到7.6。否則，使用1mol/L HCl進行調整。註意不要把pH調得太大，以免回調，否則會影響培養基中離子的濃度。
對於壹些需要更精確pH值的微生物，可以用酸度計調節pH值(使用方法請參考相關說明)。
過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，便於觀察結果。如果沒有特殊要求，壹般可以省略這壹步(本實驗不需要濾波)。很多都不需要過濾。
第五步:重新包裝
根據實驗要求，配制的培養基可分為試管或三角瓶。子包設備見圖V-1。
分裝過程中註意不要接觸噴嘴或瓶口上的培養基，以免汙染棉塞，造成汙染。
(1)液體包裝的合適高度約為試管高度的1/4。
(2)將固體分裝於單獨的試管中，裝載量不得超過1/5管高，並將試管滅菌，制成斜面，如圖V-2所示。分裝三角瓶的量不應超過三角瓶體積的壹半。
(3)壹般半固態包裝試管高度應為1/3，滅菌後垂直放置。
6 .加塞
培養基重新分裝後，在試管口或三角瓶口上放壹個棉塞，防止外界微生物進入培養基造成汙染，並保證良好的通風性能(制作棉塞的方法附在本實驗後面)。
包紮
塞好後，用麻繩將所有試管綁好，然後在棉塞周圍包壹層牛皮紙，防止滅菌時冷凝水打濕棉塞，再用麻繩綁好。用記號筆標記介質的名稱、組和日期。三角燒瓶塞好後用牛皮紙包裹，用麻繩以活結的形式系住，使用時很容易解開。類似地，培養基的名稱、組和日期用標記表示。
消毒
上述培養基在1.05kg/cm2(15 lb/in2)，121.3℃高壓滅菌20分鐘。因特殊情況不能及時消毒的，應放入冰箱暫存。
9.留出斜面
將滅菌後的試管培養基冷卻至50℃左右，將試管的棉塞端放在玻璃棒上，斜面長度不超過試管總長度的壹半。
10.無菌檢查
將滅菌後的培養基放入37℃的溫室中24-48小時，檢查滅菌是否完全。
1.活體材料:蘇雲金芽孢桿菌。
2.培養基:牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(附錄III，1)。
3.設備:90ml無菌水、9ml無菌水、無菌盤、lml無菌吸管、天平、樣品稱量瓶、記號筆、玻璃刮刀等。
第四，實驗方法
1.樣品稀釋液的配制:準確稱取10克待測樣品，置於裝有90毫升無菌水和小玻璃珠的250毫升三角瓶中，用手或搖床搖動20分鐘，使微生物細胞分散，靜置20-30秒，得到10-1稀釋液；用1的無菌吸管吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吸三次，使菌液混合均勻，得10-2稀釋液；另壹支無菌吸管吸10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吸三次，得l0-3稀釋液；以此類推，連續稀釋，制成10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9等。(圖22-9
圖22-1平板計數法用於樣本稀釋和稀釋液取樣和培養
用稀釋平板計數時，應根據樣品確定待測菌的稀釋度。當樣品中待檢測的細菌數量較大時，稀釋度應較高，反之亦然。通常用10-7、10-8和10-9的稀釋液來測定細菌數，用10-4、10-5和10-6的稀釋液來測定土壤中的細菌數。
2.平板接種培養平板接種培養有兩種方法:混合平板培養和塗抹平板培養。
(1)混合平板培養法無菌平板編號為10-7、10-8、10-9，每個編號設三個重復。按無菌操作要求，用無菌吸管吸取10-9的稀釋液1 ml，放入編號為1ml。用同樣的方法吸取每lml的10-8稀釋液放入編號為10-8的三個板中，然後吸取每lml的10-7稀釋液放入編號為10-7的三個板中(濃度由低變高時，移液管不用更換)。然後將已融化並冷卻至45-50℃的細菌培養基分別倒入9個平板中(圖22-2)，輕輕旋轉平板，使菌液和培養基混合均勻，冷疑後倒置，在適宜的溫度下培養。妳可以數菌落，直到它們長大。
(2)塗片計數法塗片計數法與混合法基本相同，只是將培養基融化後趁熱倒入無菌平板中，凝固後編號，然後用無菌移液管吸取0.1ml菌液，接種於不同稀釋數的瓊脂平板上(每個數設為三個重復)。然後用無菌抹刀將菌液均勻地塗在平板上(圖22-3)，每次稀釋都要用滅菌抹刀。更換稀釋度時，需要對抹刀進行灼燒和消毒。從低濃度到高濃度塗抹時，抹刀可以不更換。將塗抹好的平板平放在桌子上20-30分鐘，使菌液滲入培養基中，然後將平板倒置，保溫培養至菌落生長，然後計數。