原理:糖基化導致血紅蛋白分子表面陽離子的丟失。在弱陽離子交換劑中，如Biorex70，糖化血紅蛋白在非糖化血紅蛋白之前被洗脫，伴隨著離子濃度增加和/或pH降低..這壹現象催生了糖化血紅蛋白的原始術語“快速血紅蛋白”。陽離子交換色譜法可用於小型、微型或大型柱色譜法或部分或全自動PHLC/FPLC法。由於其他翻譯後修飾的血紅蛋白，如醛亞胺型、甲酰化、乙酰化、乙醛加合物、降解產物、老化偽影、異常血紅蛋白電荷交換等也不同於正常的HbA0，因此列舉了陽離子交換層析的許多幹擾因素。使用常規的HPLC方法。糖化血紅蛋白亞組分的分離可以達到滿足需要的臨床精密度。然而，已知HbA1c的峰不均勻，但包含重要的非糖基化血紅蛋白部分。少數糖化血紅蛋白也整合到HbA0的主峰中。采用特殊的柱材料(poly-CATA)和30 ~ 40 min的分離時間可以提高分離效果。這些方法可以作為參考步驟，但不適合常規使用。所有的陽離子交換色譜對pH和溫度的變化都很敏感，所以要控制pH和溫度。
說明:根據紅細胞代謝動力學，估計1°C的初始HBA值約為每天1/120(≈0.83%)。因為在適當的治療下，即使在健康人中也會產生糖化作用，所以在體外無法達到這個理論值。血糖控制不理想的糖尿病患者可以通過強化治療達到正常血糖。可以發現，HbA1c值每10 d(絕對值)最大下降率約為正常血糖的1%。由於測量糖化血紅蛋白的方法的準確性，兩個測量值HbA1c之間的差異約為1%，這可以被認為是臨床相關的。由於這些原因，HbA1c的兩次測定之間至少有2周，建議間隔4 ~ 6周。
因為糖化血紅蛋白值升高是長期高血糖的糖尿病患者的可靠指標，所以有可能診斷糖尿病。在未經治療的個體中，正常的糖化血紅蛋白值可以在臨床上排除明顯的糖尿病。然而，因為它不能檢測葡萄糖耐量異常，所以使用糖基化血紅蛋白作為診斷和/或篩選目的的唯壹參數是有問題的。
2.電泳
原理:與非糖基血紅蛋白相比，糖基血紅蛋白的總電荷和等電點的變化是瓊脂糖凝膠或pH梯度為5.0 ~ 6.5的凝膠等電聚焦電泳分離的基礎。瓊脂糖凝膠電泳中血紅蛋白亞組分的分辨率非常小，但等電聚焦可以更好地分離亞組分。也許是由於實驗缺乏自動化，重要性有所下降。
3.親和色譜法
原理:硼酸結合順式羥基。具有間氨基苯硼酸瓊脂糖價的商用親和柱可用於微柱分析和檢測。將血樣中的血紅蛋白加入層析柱後，所有糖化血紅蛋白(HbA1和側鏈糖化血紅蛋白；總的糖基化血紅蛋白)與硼酸結合，但不能通過色譜柱測量糖基化血紅蛋白。在加入高濃度的多羥基復合物(如山梨醇，其也含有順式羥基)後，糖基化血紅蛋白和硼酸的組合被替換並從柱中洗脫。親和層析對翻譯後修飾血紅蛋白和病理血紅蛋白的影響相對不敏感。只有總的糖基化血紅蛋白可以通過親和層析來測定。廣泛使用的親和色譜法允許經驗算法從總的糖基化血紅蛋白值計算“標準HbA1c”。
4.免疫測定
纈氨酸β-N末端糖基化的血紅蛋白提供了壹個易於被抗體識別的表位。單克隆抗體或多克隆抗體可用於放射免疫分析和免疫酶分析，抗體特異性識別β鏈N端糖化血紅蛋白最後4 ~ 8個氨基酸組成的表位。異常血紅蛋白或翻譯後修飾血紅蛋白無幹擾。
目前的免疫化學檢測不僅檢測HbA1c，還可以同時檢測HbA2c，因為血紅蛋白A2糖基化δ鏈的表位是相同的。直接抗β鏈最後四個氨基酸糖基化表位的抗體的免疫化學試驗也可用於檢測，如HbS1c。大多數情況下，HbA2c意義不大。雖然在鐮狀細胞病中纈氨酸β-N-氨基末端的糖基化程度可以準確測量，但仍然不能用100%代表HbA1c。
5.離子色譜法
離子色譜法具有精密度高、重復性好、操作簡單等優點，在臨床上得到廣泛應用。檢測原理由於糖化後血紅蛋白β鏈的N端纈氨酸帶有不同的電荷，總糖化血紅蛋白(GH b)和H bA在酸性溶液中具有陽離子的特性，所以通過陽離子交換層析柱時可以被酸性緩沖液平衡的樹脂吸附，但其吸附速率不同，GH b的正電荷較少，H bA的吸附速率較高。GH b和H bA可被不同pH值的磷酸鹽緩沖液洗脫，H b可被KCN轉化為高鐵血紅蛋白，用分光光度計測定。或者得到相應的H b色譜圖，橫坐標是時間，縱坐標是百分數。HbA1c值以百分比表示。目前大部分是用自動測量儀測定的。
6、等電點聚集法
它是壹種測定GH B的新技術，在聚丙烯酞酸凝膠中用載體兩性介質在薄板上形成從陽極到陰極逐漸增加的pH梯度，溶血血液中的各組分會移動到自身等電點的pH位置，從而獲得比壹般電泳法更好的分割效果和更集中的色帶。通過用高分辨率顯微密度計掃描，可以精確地確定每種成分的含量。由於可以區分不同壹級結構的HbA、HbAc、HbF、HbS、HbC，所以可以完全避免各種物質的幹擾。
7、化學發光法
利用離子捕獲免疫分析法，應用抗原抗體反應原理，結合熒光標記物，通過連接帶負電荷的聚陰離子復合物，將其吸附在帶正電荷的纖維表面。在壹系列徹底的清洗步驟後，測定熒光強度的變化率並計算濃度。使用專用試劑盒和免疫發光分析儀，檢測系統易於標準化和重復，可減少操作的技術誤差，靈敏度和特異性高，批內和批間變異系數小，回收率高，準確度高，交叉汙染率低，影響因素少。
8.酶法
原理是H b被特殊的蛋白酶分解，果糖基氨基酸在3 ~ 5 min內與HB分離。糖基氨基酸氧化酶(FAOD)產生H2O2，H2O2果糖基氨基酸，H2O2通過POD與DA- 64反應。GHb的濃度通過測量7565438±0納米處的吸光度來確定。