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如何制備低熔點瓊脂糖凝膠?

瓊脂糖凝膠的制備

⑴瓊脂糖凝膠的制備:稱取0.3g瓊脂糖,置於三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩沖液,置於三角瓶中,置於三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩沖液,將三角瓶置於微波爐中加熱至瓊脂糖溶解。向冷卻至約65℃的瓊脂糖凝膠溶液中加入溴化乙錠,並充分混合。

(2)橡膠板的制備:

①取有機玻璃內罐,洗凈晾幹;

②將有機玻璃內罐放在水平模具上,裝上擋板,放上梳子。吸少量瓊脂糖溶液封住膜的邊緣,讓其凝固,在離底板0.5 ~ 1.0 mm的位置放置壹個梳子,這樣加瓊脂糖後就可以形成壹個完美的加樣孔。如果梳子離玻璃板比較近,拔出梳子會把孔底弄破,使樣品從凝膠和玻璃板之間漏出。

(3)將剩余的溫熱的瓊脂糖溶液倒入膠膜中,使膠液慢慢散開,直至在有機玻璃板的整個表面形成均勻的膠層。凝膠的厚度在3到5毫米之間。檢查梳子的齒下或齒間是否有氣泡。

(4)在室溫下靜置約30分鐘,待其完全固化後,輕輕拔出梳子,從而在橡膠板上形成間隔開的樣品裝載孔。配好膠後,將塗滿膠的有機玻璃內罐放入含有0.5 ~ 1×TAE(Tris-乙酸)或TBE(Tris-硼酸)工作液的電泳槽中,膠面超過1 mm..

(註:溴化乙錠是壹種毒性中等的強誘變劑。使用含有這種染料的溶液時,必須戴手套。使用後應進行凈化處理。通常10 mg/ml的儲存液是用水配制,室溫下避光儲存,最終濃度為0.5 μ g/ml。)