酵母雙雜交是常用的蛋白質相互作用研究方法，其中誘餌bait和靶標prey蛋白質通過特定的載體表達系統與每個目標蛋白質進行相互作用實驗。以下是構建酵母雙雜交誘餌載體的壹般步驟：
選擇適當的酵母雙雜交系統：常用的酵母雙雜交系統包括Gal4系統和LexA系統。選擇適合妳實驗需要的系統。
設計誘餌序列：誘餌是妳感興趣的蛋白質，可以是全長蛋白或其特定區域。選擇壹個適當的片段，通常是在蛋白質的N端或C端添加壹段活化域，例如Gal4 DNA結合域。
擴增誘餌基因：使用PCR等方法從適當的模板（例如基因組DNA或cDNA）擴增出誘餌基因的DNA序列。
酵母雙雜
克隆誘餌基因到誘餌載體中：將擴增得到的誘餌基因插入到酵母雙雜交誘餌載體中。常用的載體包括pGBKT7（Gal4系統）或pLexA（LexA系統）。這些載體通常包含啟動子、標簽和選擇標記等功能。
驗證構建的誘餌載體：使用限制性內切酶消化和測序等方法，驗證插入的誘餌基因是否正確並且方向正確。
轉化酵母細胞：將構建好的誘餌載體導入到酵母細胞中。常見的方法包括化學法、電穿孔法或減壓法等。
篩選：將轉化後的酵母細胞進行篩選，壹般使用選擇培養基含有適當選擇標記的培養基。僅表達誘餌蛋白的酵母細胞可以用於下壹步實驗。