伊麗莎白壹世死後安葬在威斯敏斯特教堂的右面。1603年元月，伊麗莎白臥床不起。3月23日，已經病危且失去語言能力的她同意樞密院的安排，用手勢指定詹姆斯六世繼承王位。3月24日淩晨，昏迷中的伊麗莎白在倫敦的裏士滿王宮逝世，終年69歲。後被安葬在威斯敏斯特教堂的右面。
由於伊麗莎白終身未婚且沒有子嗣，故而在她死後，歷經118年的都鐸王朝的統治宣告終結。她死後由詹姆斯六世繼承英格蘭王位，稱詹姆斯壹世，開啟了英國的斯圖亞特王朝。
為政舉措：
伊麗莎白壹世統治時期，是英國歷史上的重要矛盾轉折期：君主專權開始向議會主權轉化。即位之初，伊麗莎白在資產階級和新貴族的支持下，推行壹系列有利於國家富強和資本原始積累的政策。在政治上強化專制王權，重用伯利勛爵威廉·塞西爾等大臣，逐漸把議會變成專制統治的工具。
慎於榮譽的頒發和顯職的授與也是伊麗莎白在位期間的特征。在將近四十五年裏，在英格蘭只授與八個貴族頭銜：壹個伯爵爵位、七個男爵爵位；在愛爾蘭只授與壹個男爵爵位。她並將樞密院的成員由三十九人降至十九人，後來再降至十四人。
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