為什麽南方雜交要用高鹽溶液？

Southern雜交壹般采用液固雜交，即探針在液相，雜交的DNA在固相。雜交發生在壹定條件下的溶液(雜交溶液)中，需要壹定的溫度。可以使用雜交瓶或雜交袋，並且液體可以在膜上連續流動。混合液可以自己做，也可以從公司購買。不同的雜交液配方差別很大，雜交溫度也不同。以下是混合解決方案公式:

PEG 6000 10%；SDS 0.5%；6×SSC；50%甲酰胺該雜交液的雜交溫度為42℃。

1.預雜交

將NC膜在2×SSC中浸泡5min，向雜交瓶中加入雜交液(8cm×8 cm膜為5ml ),將膜的背面貼在雜交瓶壁上，正面朝向雜交液。放入42℃的雜交爐中，將雜交體系升溫至42℃..將超聲破碎的鮭魚精子DNA(溶解於5min水或TE中)在65438±000℃變性5min，並迅速加入雜交瓶中，使其濃度達到65438±000μg/ml。繼續雜交4小時。鮭魚精DNA的作用是封閉NC膜上沒有DNA轉移的位點，降低雜交背景，提高雜交特異性。

交叉

倒出預雜交的雜交液，換上等量的已加熱至42℃的新雜交液，同時加入變性的三文魚精子DNA。將探針在100℃加熱5分鐘，使其變性，並快速加入雜交瓶中。42℃雜交過夜。