[目的]
本試驗方法用於果膠酶的催化活性。該方法適用於各種固體和液體果膠酶制劑。
[描述]
該方法適用於果膠酶的質量分析和質量控制。但並不是對我公司和其他公司產品絕對活性的預測，各種酶制劑的最終酶活在良好的實驗操作下仍能發揮較好的催化活性。
[原則]
果膠主要存在於植物初生壁和細胞之間，果膠是細胞壁的基質多糖。果膠包括兩種酸性多糖(多聚半乳糖醛酸和鼠李糖酸)和三種中性多糖(阿拉伯聚糖、半乳聚糖和阿拉伯半乳聚糖)。果膠酶本質上是壹種多聚半乳糖醛酸水解酶。果膠酶水解果膠，主要產生β-半乳糖醛酸。碘酸鈉法可以用來定量半乳糖醛酸，從而確定果膠酶的活性。
【果膠酶活性單位的定義】
1g(或1ml液體酶)酶粉，在50.0℃、pH3.5的條件下，每分鐘催化果膠水解生成1μ g半乳糖醛酸的酶量為壹個活性單位。
1.試劑和儀器
*本標準中使用的所有試劑均為分析純，無需任何說明。
1.1醋酸
1.2碘
1.3碘化鉀
1.4濃硫酸
1.5果膠(西格瑪公司)
1.6硫代硫酸鈉
1.7碳酸鈉
1.8可溶性澱粉
1.9水浴鍋
1.10碘量瓶
2.試劑的制備
2.1 pH值為3.5的酸性水
用乙酸將蒸餾水調節至3.5。
2.2 1%果膠溶液:
準確稱取1g分析純果膠，溶於酸水中，煮沸，冷卻，過濾至100ml。
2.2 0.1N碘溶液:
準確稱取5g碘化鉀，溶於蒸餾水中，加入2.54g碘，溶解後定容至100ml。
2.3 0.025摩爾/升硫代硫酸鈉:
準確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加入蒸餾水，調節體積至1L。
2.4 0.5%可溶性澱粉指示劑:
準確稱取0.5g可溶性澱粉，放入沸水中煮至透明。
2.5 1M碳酸鈉溶液:
準確稱取10.6g碳酸鈉，放入100ml水中。
2.6 2N硫酸:
吸取10ml濃硫酸，倒入170ml水中。
2.7酶樣品的制備
準確稱取1.000g固體酶或移去1ml液體酶樣，定容至100ml，在50℃水浴中浸泡1小時，過濾，濾液即為待測酶液。酶被稀釋了100倍。
3.程序
3.1取1%果膠酶10ml，加入5ml酶液和5ml蒸餾水(PH3.5)，在50℃水浴中反應1小時。
3.2取出煮2~3min。冷卻後，補水至20ml。
3.3取5ml反應溶液於100ml碘量瓶中，加入1M碳酸鈉溶液1ml和0.1N碘溶液5ml，搖勻，室溫下避光放置20min。
3.4取出後，加入2ml 2N硫酸，立即用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淡黃色，加入1ml 0.5%可溶性澱粉溶液，繼續滴定至藍色消失。
3.5在空白試驗中，用煮沸的滅活酶溶液或蒸餾水代替酶溶液進行滴定。
3.6為每個酶樣品制備至少兩個平行樣品。
計算
4.1求測得平行樣品OD值的平均值。
4.2根據下列公式計算酶的活性單位
酶活性=[(b-a)* n * 0.5 * 175 * 20 * n * 1000]/[51 * 52 * w * 60]
單位:微克(毫升)
式中:a:樣品滴定中消耗的硫代硫酸鈉的毫升數。
b:空白滴定中消耗的硫代硫酸鈉的毫升數。
n:硫代硫酸鈉的摩爾濃度。
0.5: 1當量硫代硫酸鈉相當於0.5當量半乳糖醛酸。
20:反應液體的總體積
51:酶溶液的體積為1毫升。
52:吸取反應溶液
n:稀釋倍數
w:酶粉的重量g或酶溶液的體積ml。