如何防止RNA在提取過程中降解

用變性劑破碎細胞或組織，然後用氯仿等有機溶劑提取RNA，再沈澱、洗滌、幹燥，最後溶解。但是由於RNA酶的無處不在，RNA隨時都有可能被降解，所以實驗中需要註意的地方很多，稍有疏忽就會前功盡棄。0T3z(F & amp；_、D6c % " h6ya 6 _ RNA提取的壹般步驟-O:Y+x $ p # s8u 4m 9s RNA提取過程中有五個關鍵點，即:樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復合物變性；有效抑制內源性核糖核酸酶；有效地從DNA和蛋白質的混合物中分離RNA對於多糖含量高的樣品，還涉及到多糖雜質的有效去除。但最重要的是抑制核糖核酸酶的活性。目前提取RNA的方法主要有兩種:提取總核酸，然後用氯化鋰沈澱RNA；在酸性條件下直接提取，DNA和蛋白質進入有機相，RNA在酸性條件下留在水相。第壹種提取方法會導致小分子量RNA的丟失，目前這種方法出現的頻率很低。(O(g；^+k)f+i&；]%P實驗步驟:* l &；D6S5E (Q1f (G2 | j，0s)破碎組織→分離RNA→沈澱RNA→洗滌RNA→溶解RNA→保存RNA。6D8}。q；y，g*X1，組織破碎和RNase滅活可同時進行，組織破碎可用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等。，加入β-ME可以抑制RNase的活性s%f，` 0[1d*m！]0e2。壹般用苯酚、氯仿等有機溶劑分離RNA，加入少量異戊醇。這壹步之後，RNA壹般分布在上層，與蛋白質層分離。& ampx . P)I)Y；L#u/[3]壹般用乙醇、3MNaAc(pH-5.2)或異丙醇沈澱RNA。2 @ 0d & ampz7？+i，g1@4，用70%乙醇洗滌RNA。有時候為了避免洗RNA，可以省略這壹步。洗完後的乙醇可以烘幹或烘幹，但不能太幹，否則不容易溶解。3@%V"o9v+I1J2o9k"z5。通常，TE用於融化RNA。；l5f . n6 }(s 1t % Z & amp；J6。低溫保存RNA。為了防止微量RNA酶汙染，從富含RNA酶的樣品(如胰腺和肝臟)中分離的RNA需要保存在甲醛中，以保存高質量的RNA，特別是長期保存。從大鼠肝臟提取的RNA在水中保存壹周後基本降解，而從大鼠脾臟提取的RNA在水中保存三年後仍保持穩定。此外，長於4kb的轉錄物比小轉錄物對痕量RNA酶的降解更敏感。為了增加儲存RNA樣品的穩定性，可以將RNA溶解在去離子甲酰胺中，並儲存在-70℃下。用於保存RNA的甲酰胺不得含有降解RNA的雜質。來自胰腺的RNA可以在甲酰胺中保存至少壹年。待RNA待用時，可用以下方法沈澱RNA:加入NaAc至0.3M，12000×g離心5分鐘。& ampP3[7m*^$U$_ "？:F "徐*N(？(I)通過氯化鋰法提取總RNA:“u；}‘我！r'^'^&；l該方法利用高濃度尿素使蛋白質變性並抑制RNA酶，利用氯化鋰選擇性沈澱RNA。特別適用於從大量樣本中提取少量組織RNA，具有快速、簡潔的優點，但也存在DNA汙染量小、RNA產量低、小RNA片段丟失等缺陷。#~*S:}9`*r4Z3P測試試劑:" d$r6Q+_.I8Q1，氯化鋰/尿素溶液，氯化鋰126g(3M)尿素，360g(6M)水至1L，過濾滅菌為7 _ 8w65433。I4Z2，懸掛10mM？Tris-HCL(pH7.6)，1mM？EDTA(pH8，0)，0.5%SDS！m8Q4R，]& amp；Y:b#`7d測試步驟:7[6？$`*};O7_Z'{1，對於大量組織或細胞，每克組織或細胞加入5-10 ml氯化鋰-尿素溶液，高速勻漿2分鐘；對於少量細胞(107細胞/ml)，向每克組織或細胞中加入0.5ml氯化鋰-尿素溶液，進行手動攪拌，並轉移至Eppendof管中。& ampY) b: e，q "l/q: \ $ S2。漿液在0-4℃放置4小時後，在65438±02000g離心30分鐘。x-C6D-N/N0K！T2a3。取沈澱，將1/2體積的氯化鋰-尿素溶液加入到原來的攪拌勻漿溶液中，重復步驟2。)y-x)S0K9y6j，e4。沈澱用原漿液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液復溶後，加入等體積的苯酚/氯仿/異戊醇，室溫放置15-30分鐘，並不時搖動混合，4000g離心5分鐘。3d2v' I 1 ~ (* D5)，取上層水相，加入1/10倍體積的3M乙酸鈉(pH5.2)和2倍體積的乙醇，於-20℃靜置1小時，離心5000g g. L4a'Q4u"l:a*K%Z$？(e6，70%乙醇洗滌沈澱壹次。真空幹燥。3};R0[/Q'G9q7]，RNA溶液溶解沈澱得到RNA，包裝保存於-70℃。0f。X%R(H%B7g！y7j5u$C'|)[%~！J3D:Q蛋白酶-熱酚法6 | "0b * [) p3s * c4b4h4l該方法適用於提取病毒RNA *I(i+b#r！k測試試劑:$？4[7h 9 `]j 1，蛋白酶K(終濃度50μ g/ml)，J5PL6V/T7 [/I2，2×緩沖液:1%SDS？20mMTris-HCL(pH7.6)？0.2MnaCL9h，p]y+\$Z)O測試步驟:#W3v8G1[$]5y1。向純化的病毒溶液中加入等體積的緩沖液和蛋白酶K，並在37℃下保持40-50分鐘。-K0p/E'G0M#Q-z7n，{#d2，加入等體積預熱到65℃的苯酚溶液，在65℃保溫5分鐘，然後輕輕靜置。w！`;W (~，e: i3 3)，離心，取上清液，用氯仿提取壹次。，|(Z0d；J2 @ 7m+d2Q & amp；XH4。取上層水相，加入1/10倍的3M乙酸鈉(pH5.2)和2倍的乙醇，於-20℃靜置1小時，5000g離心(1000 g，10 min)。7[/w，h2d6U$k5，70%乙醇洗滌沈澱壹次。真空幹燥。% A5Y{(w%]3a*y，Oe)P6。用RNA溶液溶解沈澱，得到RNA，分裝，保存於-70℃。植物RNA提取困難的對策)o5B7d/Q3_酚類化合物的幹擾及對策:a9D*Z3K？7W許多植物組織，尤其是水果(如蘋果、櫻桃、李子、葡萄等。)和樹木富含酚類化合物。酚類物質的含量會隨著植物的生長而增加。因此，從年輕的植物材料中提取RNA更容易。此外，針葉樹針葉中多酚的含量遠高於落葉植物葉片中的含量。植物材料在均質時會釋放出酚類物質，均質後的漿料氧化後變成褐色，隨著氧化程度的增加而加深。這種現象被稱為布朗效應。氧化酚類化合物(如醌類)能與RNA穩定結合，從而影響RNA的分離純化。然而，Newbury等人發現RNA提取的難易程度與物質中酚類化合物的總量之間沒有相關性，因此他們認為並不是所有酚類化合物都影響RNA提取。但壹般認為，所謂的“縮合單寧”，即聚合多羥基黃酮醇(如原花青素)，是壹類影響RNA提取的化合物。目前去除酚類化合物的壹般方法是在提取初期防止其被氧化，然後從RNA中分離出來。9b0S！}0U6|9k/l！V"vg1~/@防止酚類化合物被氧化的方法:" v；y，a4k7n/Z1，還原劑法:壹般在萃取緩沖液中加入(-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)或半胱氨酸，以防止酚類物質被氧化，有時萃取液中(-巰基乙醇的濃度可高達2%。(-巰基乙醇等。)也能中斷多酚氧化酶的二硫鍵，使其失活。蘇等認為，加入(-巰基乙醇(終濃度:1%)過夜沈澱RNA，可以阻止酚類化合物在此過程中的氧化。硼氫化鈉(NaBH4)是壹種可以還原醌的還原劑。用nabh4處理後，提取緩沖液的棕色可以減少，醌類化合物可以還原為多酚類化合物。& amph . z . p+~ & amp；t % t5G & ampG1M-P/q！U2。螯合劑法:螯合劑聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)中的co-n =基團對多酚類化合物有很強的結合能力，其結合能力隨著多酚類化合物中芳香羥基數量的增加而增強。原花青素芳香環上含有很多羥基，因此可以與PVP或不溶性PVPP形成穩定的復合物，使原花青素作為多酚氧化酶的底物不能被氧化，在後續的提取步驟中可以被除去。當用PVP去除多酚時，pH值是壹個重要的因素。當pH高於8.0時，PVP結合多酚的能力會迅速下降[11]。當原花青素的質量較大時，PVPP不能單獨去除所有這些化合物，因此需要與其他方法結合使用。P%N0w/t7r3，Tris-硼酸法:如果提取緩沖液中含有Tris-硼酸(pH7.5)，其中的硼酸可與酚類化合物通過氫鍵形成復合物，從而抑制酚類化合物的氧化及其與RNA的結合。這種方法非常有效，所以Lбpez-Gбmez等人在提取緩沖液中不添加其他還原劑。但是，如果Tris-硼酸的濃度過高(> > 0.2M)，RNA的回收率會受到影響。# #p8]0^8K3a4.牛血清白蛋白(BSA)法:原花青素與BSA的相互作用可以類似於抗原與抗體的相互作用，形成可溶或不溶的復合物，減少了原花青素與RNA結合的機會，從而增加了RNA的產量。如果牛血清白蛋白和PVPP結合使用，萃取效果會更好。因為BSA中往往含有核糖核酸酶，所以要加入肝素來抑制核糖核酸酶的活性。)~#H/y(P7Q)j4G*w1G8l5、丙酮法:Schneiderbauer等人用丙酮在-70℃下提取冷凍磨碎的植物材料，可以有效地從富含酚類化合物的植物材料如雲杉、松樹、山毛櫸中分離出高質量的RNA。@+?-X/V9z8T8H:B3C！去除W'C酚類化合物:z # h)G0H & amp；未氧化的酚類化合物可以通過用Li+或Ca2+沈澱RNA來除去。與PVP、不溶性PVPP或BSA結合的多酚可通過離心或通過苯酚和氯仿提取直接除去。曼寧使用高濃度的2-丁氧基乙醇(50%)沈澱RNA，而多酚溶解在2-丁氧基乙醇中並除去。然後用含有50% 2-丁氧基乙醇的緩沖液洗滌RNA沈澱，以除去殘留的多酚。他認為即使多酚被氧化，其氧化產物仍可溶解在高濃度的2-丁氧基乙醇溶液中並被除去，不需要用NaBH4處理。5C6Y8a1SV:`2~多糖的幹擾及其對策:6i-B3 R4 ~ $ t & amp；o多糖汙染是提取植物RNA經常遇到的另壹個棘手問題。植物組織中往往富含多糖，多糖的許多理化性質與RNA相似，很難分離。在去除多糖的同時，RNA也被帶走，導致RNA產量減少；RNA沈澱時，還會產生多糖的凝膠狀沈澱，不溶於水或溶解後產生粘稠溶液。由於多糖可以抑制許多酶的活性，因此被多糖汙染的RNA樣品不能用於進壹步的分子生物學研究。在常規方法中，通過SDS-鹽酸胍處理可以部分除去壹些多糖；在高濃度Na+或K+離子存在下，壹些多糖可以通過苯酚和氯仿萃取除去。壹些多糖也可以通過LiCl沈澱RNA而留在上清液中。然而，即使通過這些步驟，仍有相當多的多糖與RNA混合在壹起，因此需要更有效的方法來解決植物RNA分離純化中的多糖汙染問題。7['X/e，d8x(B-p(| 9C & amp；低濃度乙醇沈澱多糖是去除多糖的好方法。向RNA提取液或溶液中緩慢加入無水乙醇，直至最終濃度為10% ~ 30%，多糖可沈澱出來，而RNA仍留在溶液中。通常，乙醇被添加到植物材料的勻漿中。例如，當Lewinsohn等人從裸子植物的木質莖中提取RNA時，向勻漿上清液中加入乙醇直到最終濃度為10%以沈澱多糖。而Tesniere等人從葡萄漿果組織中提取RNA時，在CsCl超速離心和乙醇沈澱後的RNA溶液中加入30%乙醇沈澱多糖，進壹步純化RNA樣品。！I5b5m*z9G8M4~-N/D另壹種常用的方法是醋酸鉀沈澱多糖法。當從雲杉組織中提取RNA時，巴赫洛爾等人向勻漿上清液中加入1/3體積的5M乙酸鉀(pH4.8)溶液以沈澱多糖。Ainsworth在從魯梅克斯花組織中提取RNA時，加入1/5體積的5M乙酸鉀(pH4.8)溶液。Hughes等人在勻漿中加入1/3體積的8.5M醋酸鉀(pH6.5)溶液，去除棉花葉片和花粉提取RNA時的多糖等雜質。從某些植物材料中提取RNA時，將上述兩種方法結合起來。比如Lбpez-Gбmez等人從芒果果皮中提取RNA時，在勻漿中加入0.25體積的無水乙醇和0.11體積的5M醋酸鉀溶液，去除多糖雜質。蘇等在去除褐藻多糖時，單獨使用乙醇或醋酸鉀效果不佳，只有兩者結合使用效果最佳。6 C9 | 5q 1b 9[5l 1s+NFANG等人認為緩沖液中高濃度的NaCl會有助於去除多糖。常等從松樹中提取RNA時，緩沖液中NaCl的濃度為2.0M，通過氯仿提取和乙醇沈澱從多糖中分離出1.0M RNA。曼寧是將胡蘿蔔籽等物料經苯酚提取後的上清液稀釋，調節Na+離子濃度至80mM，再加入0.4倍體積的2-丁氧基乙醇沈澱去除多糖。3B1h#M'{+{0U%U，K2@，v蛋白雜質的影響及其對策:$ @-g5o(f 1 S9 _ 2v * g2n/蛋白是汙染RNA樣品的另壹個重要因素。由於核糖核酸酶和多酚氧化酶也屬於蛋白質，所以要獲得完整高質量的RNA，就必須有效去除蛋白質雜質。常規方法是在冷凍條件下研磨植物材料以抑制核糖核酸酶等的活性。提取緩沖液含有蛋白質變性劑，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)等。，使得蛋白質在均質化過程中可以變性和凝結；壹些方法使用蛋白酶K降解蛋白質雜質。蛋白質可以通過苯酚和氯仿萃取進壹步去除。T7v(F1J9@+EWilcockson利用蛋白質和RNA在高氯酸鈉溶液中的不同溶解度來分離它們。在70%高氯酸鈉溶液中，RNA的溶解度大於蛋白質，因此大部分蛋白質沈澱。然後，向離心上清液中加入兩倍體積的無水乙醇，此時，RNA可以沈澱，並且可以溶解在70%高氯酸鈉溶液中的殘留蛋白質保留在上清液中。這將去除大部分蛋白質。3qe/\ * I " A & amp；次生代謝產物的影響及其對策::N3 |)NfK # n；P'f6h0J2A0{從植物組織中提取高質量RNA的另壹個難點是，許多高等植物組織，尤其是成熟組織，會產生壹些水溶性的次生代謝產物，這些次生代謝產物很容易與RNA結合，與RNA壹起被提取***，從而阻礙了具有生物活性的RNA的分離。因為不確定這些次級產物是什麽，所以目前沒有特別的方法來解決這個問題。貝克等人綜合了休斯等人的選擇性沈澱法、奇爾格溫的氯化銫梯度離心法和伊弗森的RNA回收法，從松樹種子和成熟松針等植物組織中純化RNA。(Ms5O%f！H-Q*\(m"`(}由於植物組織尤其是高等植物組織內外成分的復雜多樣性，從植物組織中提取RNA的難度要比其他生物材料大得多。實踐中經常發現，即使同壹植物的不同組織有不同的RNA提取方法；含有壹些幹擾因子的不同植物材料可能有不同的RNA提取方法；甚至同壹植物的同壹組織材料來自不同的基因型，其RNA提取方法也可能不同。因此，對於壹種植物或其組織，必須通過探索和實踐建立相應的RNA提取方法。# S0a # G7L3S & ampa隨著植物分子生物學研究領域的擴大，從植物材料中提取RNA作為其研究基礎的過程中肯定會出現新的困難，但隨著不斷的探索和經驗的積累，科學家們壹定會很快解決這些困難，為植物分子生物學的發展鋪平道路。植物RNA提取中的壹些特殊方法植物RNA提取中的壹些特殊方法$ e *[2u(e % h ')]【多酚植物RNA提取:！j！d，]2V(R！B& amp；蘋果、棉花等多酚植物提取的O RNA，TRIZOL是提取不出來的。這種方法已經被證明是有效的，提取的RNA純度不是特別高，但是足夠northern使用。6j & ampd2u(\ 6 w8 _ & amp；O4E1X1t實驗試劑:#s7s8H！R#W1y#g提取緩沖液200ml:NaCl 1.1688g 100mm tris 2.4228g 10mm(tris-HCl 8.0)EDTA 5.8450g 10mm SDS 2.0000g 60。T2@)t4W'F測試步驟:！Ta0I*C(w5S"E*A'W1，1.5ml離心管液體N2，加入0.1g樣品，立即加入500ul苯酚氯仿，然後加入500ul提取緩沖液，劇烈搖動1-2min，置於冰上5minF3S0V5@0s7i1T2，4℃ 12000rpm離心15min，將上清液轉移至新管中，加入氯仿異戊醇提取壹次。)H'L7d#d"y8@3，取600ul異丙醇，在-20℃沈澱20min。&;W:m2r:I4\4l#J4，12000rpm離心10min。！I.Y.\8b7A5。用70度的乙醇洗滌沈澱物。k！T.D1[0w+？)_0D5？6、8000轉/分鐘，”a；y#}'F(`5}6I+N！X7。幹燥沈澱物，並將其溶解在30ulDEPC水中。；^0Q-R+`5j(n'['m9M#m/r3o2O！t6z $ ` 1m & amp；木本裸子植物銀杏的RNA提取方法；v！H0 `？銀杏、季翔等6R木本裸子植物含有較多的酚類、多糖等次生物質，極大地幹擾了RNA的分離純化，嚴重影響了提取RNA的質量和產量，並阻礙了相關的分子生物學實驗。目前提取RNA的方法很多，Trizol試劑盒、SDS等常規方法都無法提取銀杏RNA。而舒君昌等人(1993)的CTAB法質量差，降解嚴重。改進了提取步驟，獲得了高質量的銀杏RNA樣品。/s4i*Vk8S)x測試試劑:！]!m(q # E7N3t；#i.m([1，1 mtris:12.11 gtris)，溶於60mL水中，用濃鹽酸調節pH至Ph8.0，定容至60mL。溶解在無菌DEPC水中。` 4c9{)p2\4t2，500mm EDTA:18.61g EDTA”H2O加入80mL水中，攪拌溶解，用NaOH調節pH至8.0，定容至100mL。；V#x*j！H4y！G4M#q3c5P3，10 mol/l ICL: 42.4 glicl，100 ml水可溶解。9i)@ a ' \ & amp；W+cp*g4，提取緩沖液(DEPC水處理):2%CTAB(蛋白質變性劑)。2%PVPK30(去除多酚)100mm Tris-HCl(pH 8.0)25mm EDTA(金屬螯合劑)2.0MNaCL(去除多糖和CTAB)配方:2g CTAB。10 ml 1 mol/ltris，5 ml 500 mm EDTA，11.7 g NaCl，定容至100mL。)o+\5E！x；O#A(M+P8H*K9n0q5)，亞精胺(提取時加入少量)(RNA酶抑制劑)#J9g6O/h(u'd6，4% 0-疏水乙醇(提取時加入)(去除多酚)' De，d(J.K$z！O9f7，氯仿異戊醇(24:1)(提取蛋白質))U)A+]4\#Q8，10MLiCL(沈澱大分子RNA) 7m+b) G4J4M50F-\ 9。SSTE(溶解的RNA)1.0 mnacl 0.5% SDS 1mm EDTA(pH 8.0)10mm tris HCl(pH 8)配方:2.9 g NaCl，0.25 gsds，0.5 50mL 1 mtris，65438+。. m5z+J3X0V & amp；967y # r試驗準備:_ 5z 9 }”f % q6t 1、研缽、玻璃器皿用錫紙包裹，在200℃以上的溫度下烘烤2小時以上，或在180*C的高溫下烘烤4小時。；X7n3w、W2}9M2、塑料制品(槍頭、離心管)應為新的，用報紙包好，121'C高壓滅菌40min，或連續兩次121'C高壓滅菌，每次20min，然後在烘箱中烘幹。；X * f+~，V7). a3 .所有溶液配好後，加入DEPC水使DEPCuJ濃度為0.1%，37℃過夜，1211C高壓滅菌40min。(Tris不能用DEPC處理，所以它是在用DEPC處理過的水溶液滅菌後制備的。))x & ampb,{%e"^&；F:s0q測試步驟:“Y6U+`2C*\4X2a#r根據文獻中的CTAB法稍加改進(舒君昌，1993)。；F+e9i # h/Q7m * a *] 1。向10ml離心管C的水域中加入4mL提取液，並加熱。$D+？4w7\3J:w，M2。用液氮冷卻研缽，在研缽中加入少量抗氧化劑PVP，取1g低溫冷凍銀杏葉，迅速放入研缽中，不定時加入液氮，防止葉子在研磨過程中融化，充分研磨後立即加入預熱的提取緩沖液中，用手力攪拌均勻。6C4i+L/Z*C5G)v3，65℃，水中1min，然後冷卻至室溫。(N2@)美國，{9M"e8f4，加入等體積(4mL)的氯仿:異戊醇X17(2=L:1)，混勻，10000rpm，40C，離心10min。(H6Po1y8p#？5.仔細吸取上清液，加入同體積(4mL)的異戊醇(24:1)，混勻，10000rpm，40C，離心10min。{#k/z5r:x:v1x6。吸取上清液，加入1/4體積的IOMLiCL，混勻，4℃沈澱過夜，然後以10000rpm離心20min。7xP4o6z1D！[8] 7.用槍吹幹，沈澱物用500uLSSTE溶解，轉移至65438±0.5ml離心管中，加入等體積的氯仿和異戊醇，混勻，65438±00000 rpm，40C，離心65438±00min。，H2b7C1d*[6r4c8]，離心取上清液，加入兩倍體積的無水乙醇，在-70℃沈澱至少30分鐘，或在-200℃沈澱2小時。”w * c' y1p-T5k)，` 9，12000rpm，40C，離心20min，請用70%乙醇洗兩次，將沈澱物吹幹。1x，S*X0V"y6F/l10，用40uLDEPC處理水溶解沈澱，得到RNA樣品。8f2C-s 4r 3 o9 R4 te & amp；{11.除電泳和紫外檢測外，其余RNA保存在-70℃冰箱中備用。Q0o7V。]9x，{1i:__！U*X1m5G9A(W%U改良Krapp提取法:1r)r#s3~|.q1v.w測試試劑:' c7z 1)J5A &；f & ampW(Kd1，RNA提取:母液:4mol異硫氰酸胍20mmolEDTA20mmolMESpH7.0 .工作液:取400ml母液，加入1.7ml2-ME，4℃保存備用。/a . I＄E . RS % z2，RNA重懸:2 mollic 10 mmolnaac，調整終體積至250ml，pH5.2，滅菌後4℃保存。2u；J1S9V8a.j試驗步驟:)O/o，L#q-D8v)U1，取0.5~1g新鮮植物材料，冷凍幹燥。如有必要，加入0.2g沙子壹起研磨，然後加入10mlRNA提取並充分混合。7nQ:B"SN9B！J$u2，4℃下8000轉/分鐘離心65438±00分鐘，將上層水相轉移至幹凈的離心管中，加入等體積的苯酚/氯仿萃取，4℃下8000轉/分鐘離心65438±00分鐘。1N:K+]3R"a7`3。將上清液轉移至幹凈的離心管中，用10ml氯仿洗滌上清液1次(加入10ml氯仿並充分混合後，在4℃下以8000rpm離心10min。).$ p+y，p/-w/e 'g "k0y: [4。小心地將上清液轉移到另壹個幹凈的離心管中，加入1/10vol3molNaAc和2vol冷無水乙醇，在-80℃沈澱2小時。:t & ampM8O1O！C-w5a5，8500rpm離心30分鐘，小心棄去上清液，將沈澱物重懸於RNA重懸液中，4℃放置65438±0小時。9b7Z#K4v(y%l8Q0a8N)I%|6，8500rpm離心10min。在4℃下，棄去上清液，沈澱並溶於適量DEOC處理水中。檢測後包裝，在-70℃保存。