(1)母種的生產與培養
①制作母培養基:將250克馬鈴薯、30克瓊脂、25克葡萄糖和3克維生素B加入2000米1。
在水中加熱至瓊脂完全沸騰，得到母種培養基；
②母種培養:取母種培養基200ml，置於300ml試管中，用棉花塞住管口，將試管置於65438±025℃高壓滅菌器中滅菌65438±0。5h，然後冷卻至室溫，放入密封無菌接種盒中，每個試管接種1cmX 1cm菌絲體。
在步驟(1)中，土豆需要提前在水中煮沸半小時，然後撈出，再與瓊脂、葡萄糖、維生素B壹起在水中煮沸，直到瓊脂煮沸，然後將煮好的培養基放入試管中，凝固後用棉花凍住試管的管口。培養母種時，在將試管放入接種箱前，還需要用75%的酒精擦拭試管，並噴灑試管外壁進行消毒。
將試管放入無菌接種箱時，還需要將接種用的下部，如托盤、酒精燈、打火機、用具、接種鉤、鑷子等放入接種箱內消毒。在接種箱內消毒，可將裝有高錳酸鉀和甲醛混合物的被子放入接種箱內，消毒時應密封接種箱。
(2)原種的生產和培育
(1)制作原種培養基:取80%的小麥、10%的木針和10%的麥麩，將小麥煮熟，取出，用木針和小麥粒攪拌均勻，控制含水量為60-80%，放入培養瓶中，用棉花塞住瓶子，將培養瓶放入火鍋中，滅菌。
(2)原種培養:將培養瓶和裝有母種的試管放入接種盒中密封半小時，然後將試管中的其他種子接種到原種培養基的培養瓶中，保持溫度在20℃。
(3)比較文化的生產和培養
(1)制作培養基:取75%的小麥，煮熟，取出，放入15%的木針中，
將5%的麥麩和5%的泥攪拌均勻，含水量為60% -80%。它們被包裝在聚丙烯袋中，密封，並在滅菌鍋中滅菌。它們在常壓下於100℃儲存4小時，然後取出並冷卻至室溫。
(2)培育栽培種:將原種子培養基的聚丙烯袋和培養瓶在接種箱中密封半小時後，將步驟(2)中培育的原種子接種到聚丙烯袋巾中，在20℃下培養15-20天即可獲得栽培種。
在上述步驟(1)之前，需要采集新鮮的羊肚菌子實體，並切成直徑。
2-3mm的菌塊，高壓滅菌後取PDA培養碼，將菌塊置於PDA培養基上，將PDA培養基置於20℃培養箱中，數周後即可獲得菌絲體。