密封在western blot中起什麽作用？

封閉是塗布後用高濃度無關蛋白溶液重新塗布的過程。當抗原或抗體被包被時，使用的濃度較低，並且在吸收後固體載體表面上仍有未被占據的間隙。密封是指在這些空隙中填充了大量不相關的蛋白質，從而排除了後續步驟中幹擾物質的重新吸附。關閉的程序類似於包裝的程序。最常用的封閉劑是0.05%-0.5%牛血清白蛋白，10%小牛血清或1%明膠也用作封閉劑。脫脂奶粉也是壹種很好的封閉劑，它最大的特點是價格便宜，可以高濃度(5%)使用。優質的速溶食用低脂奶粉可以直接作為封閉劑，但由於奶粉成分復雜，封閉載體難以長期保存，在試劑盒的制備中很少使用。是否需要密封取決於具體的實驗條件。不是所有的固相都需要密封，但是密封不當會增加負背景。壹般來說，只要酶標活性高，在操作過程中可以徹底清洗，不需要密封就可以得到滿意的結果。