酪蛋白的制備

U.edu.cn/jingpin/swhx/shiyanzhidao/5.doc實驗5酪蛋白1的制備。目標1。了解從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法。2.掌握等電點沈澱法提取蛋白質的方法。二、原理牛奶中的主要蛋白質是酪蛋白，含量約為35g/L..酪蛋白是含磷和蛋白質的混合物，等電點為4.7。基於等電點溶解度最低的原理，當牛奶的pH值調節到4.7時，酪蛋白沈澱。用乙醇洗滌沈澱物以除去脂類雜質，可獲得純凈的酪蛋白。三。材料、試劑和器具(壹)材料、鮮奶(壹)試劑1、95%乙醇1 200mL2、無水乙醚1 200mL3、0.2mol/L pH4.7乙酸-乙酸鈉緩沖液300ml，先配制溶液A和溶液B: 0.2mol/L乙酸鈉溶液稱NAAC 3H2O54.44g，定容至2000ml。溶液B: 0.2mol/L乙酸溶液，稱取12.0 g優純乙酸(含量大於99.8%)至1000ml。將1770毫升溶液A和1230毫升溶液B混合，得到3000毫升pH值為4.7. 4的醋酸-醋酸鈉緩沖液。乙醇-乙醚混合物:乙醇:乙醚= 1: 1 (v/v)(二)儀器1、離心機2、抽濾裝置3、精密pH試紙或酸度計4、電爐5、燒杯6、溫度計4。操作步驟(I)酪蛋白65438的粗提取。邊攪拌邊緩慢加入100mL預熱至40℃、pH4.7的醋酸緩沖液。用精密pH試紙或酸度計將pH值調節至4.7。將懸浮液冷卻至室溫。離心65438±05分鐘(3000轉/分鐘)。棄去上清液，得到酪蛋白粗品。(2)酪蛋白的純化:1，用水洗滌沈澱3次，離心10分鐘(3000轉/分鐘)，棄去上清液。2.向沈澱物中加入30mL乙醇，攪拌壹會兒，將所有懸浮液轉移至布氏漏鬥中進行抽濾。用乙醇-乙醚混合物洗滌沈澱物兩次。最後，沈澱物用乙醚洗滌兩次，然後瀝幹。3 .將沈澱物鋪在表面晾幹；從而獲得純凈的酪蛋白。(3)準確稱量並計算含量和收率。含量:酪蛋白g/100 mL牛奶(g%)。配方中理論含量為3.5g/100mL牛奶。