壹步生長曲線分為孕育期、裂解期和穩定期。
壹步增長曲線的不同階段
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潛伏期
指從噬菌體核酸侵入宿主細胞到裝配第壹個成熟噬菌體顆粒的時間。可分為兩個階段:1,隱晦階段:指宿主細胞被人工裂解(用氯仿等)後的壹段時間。)在孵化期早期,此時細胞正處於復制噬菌體核酸和合成蛋白質衣殼的階段;2.細胞內聚集期:即潛伏期的後期,這意味著在隱晦期之後,如果人工裂解細胞,裂解物已經有壹段時間的感染性,這意味著噬菌體顆粒已經在細胞內組裝,這可以通過電鏡觀察到。
開裂期
孵育期後,宿主細胞迅速裂解,溶液中的噬菌體顆粒迅速增加。噬菌體或其他病毒顆粒不能單獨生長,因為它們只是由個體組裝而成。此外,如果宿主細胞突然破裂,理論上,它們的破裂是瞬間發生的。但實際上,由於宿主群體中每個細胞的裂解不能同步進行,所以出現了較長的裂解期。
固定相
意味著所有被感染的宿主細胞已經被裂解,溶液中的噬菌體數量已經達到峰值。在此期間,每個宿主細胞釋放的噬菌體顆粒的平均數就是裂解量。
實驗法
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壹步生長曲線的實驗方法是:首先將對數生長期的敏感菌懸液與適量的噬菌體混合。通常,噬菌體和細菌的混合比例為1:10,以防止幾個噬菌體同時感染壹個細菌細胞。吸附幾分鐘後,向混合溶液中加入壹定量的噬菌體抗血清,以中和未吸附的噬菌體。然後高倍稀釋培養液,避免二次吸附和感染。培養後定期取樣,將含噬菌體的樣品與敏感菌混合,在平板上培養,計算空斑數。結果表明,在吸附後的最初壹段時間(5 ~ 10 min)內,噬菌斑數量沒有增加,說明噬菌體還沒有完成復制和組裝,這段時間稱為噬菌體的潛伏期。在潛伏期(感染後20 ~ 30 min)後,平板中的噬菌斑數量突然線性上升,說明噬菌體已經從宿主細胞中釋放出來,稱為裂解期。每個感染細菌釋放的新噬菌體的平均數量稱為裂解量。當宿主完全裂解,溶液中噬菌體的滴度達到最高點時,稱為靜止期。
結論
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通過壹步生長曲線,可以得到病毒的潛伏期和破解量。潛伏期是病毒顆粒吸附細胞和被感染細胞釋放後代所需的最短時間。裂解量是每個感染細胞產生的平均子代病毒顆粒數,其值等於穩定期感染細胞釋放的全部子代病毒數除以潛伏期感染細胞數,即等於穩定期病毒滴度與潛伏期病毒滴度之比。
單脈沖曲線
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定量描述強毒噬菌體生長規律的實驗曲線。基本步驟是用稀釋的噬菌體懸浮液感染高濃度的宿主細胞,以確保每個細胞吸附的噬菌體不超過壹個。幾分鐘後,停止吸附,稀釋並在細菌的最佳生長溫度下培養。在壹定時間內,每隔幾分鐘取樣進行效價測定。以效價為縱坐標,培養時間為橫坐標繪制的曲線為壹步生長曲線,可以反映每種噬菌體最重要的三個特征參數:孵化期、裂解期和裂解量。