紅豆杉細胞系合成紫杉醇能力低,傳代不穩定是限制其大規模培養的主要原因。到目前為止,紅豆杉細胞培養生產紫杉醇已達到中試水平,但要實現大規模生產,關鍵是提高培養產量和紫杉醇含量,選擇高產細胞系。因此,建立穩定的高產細胞系及其穩定的保存技術是工業化生產的前提。
紅豆杉無性系整合紫杉醇能力差,不能穩定傳代是限制其大規模栽培的主要原因。到目前為止,紅豆杉無性系培養生產紫杉醇已達到中試水平,但要實現規模化生產,關鍵是通過選擇高產無性系來提高培養物和紫杉醇的產量。因此,工業化生產的前提是建立穩定的高產細胞株和穩定的儲存技術。
本研究的目的是通過添加前體和紫外線誘變來篩選產紫杉醇的細胞系。主要結果如下:
本研究的目的是通過增加前體篩選,從紫外誘變中篩選出高產紫杉醇的細胞株。獲得的主要結果如下:
(1)紅豆杉細胞對前體苯丙氨酸的耐受性較高,作用緩慢且持續時間較長。當苯丙氨酸濃度達到4.0mmol/L時,繼代培養不再生長。因此,最佳篩選濃度為3.0 mmol/L
(1)紅豆杉細胞對前體苯丙氨酸具有相對高水平的耐受性,並且受到的影響相當緩慢且持續時間長。苯丙氨酸濃度達到4.0 mmol/l時,繼代培養無法生長,因此過濾最適宜的濃度為3.0mmol/L
(2)紅豆杉細胞對前體苯甲酸鈉的耐受性低,作用迅速且持續時間短。苯甲酸鈉濃度為0.5mmol/L時,細胞生長良好,但促進作用不明顯。當苯甲酸鈉濃度為1.5mmol/L時,細胞不能生長。當苯甲酸鈉濃度為1.0mmol/L時,繼代培養不能再生長,當苯甲酸鈉濃度為0.5mmol/L時,繼代培養能再生長,因此最佳篩選濃度為0.5 mmol/L左右。
(2)紅豆杉細胞對前體苯甲酸鹽的耐受性相對較低,且受影響的速度較快,持續時間較短。苯甲酸鹽濃度為0.5mmol/L時,細胞生長良好,但促進作用不明顯。當苯甲酸鹽濃度達到1.5mmol/ L時,細胞停止生長,當苯甲酸鹽濃度達到1.5mmol/L時,繼代培養不能生長,而在0.5mmol/ L時生長,因此,過濾的理想濃度為0.5mmol/L左右
(3)紫外誘變結合前體物篩選紅豆杉高產細胞系是可行的。當苯甲酸鈉為0 mmol/L時,紅豆杉細胞開始生長。但壹定程度上是隨機的,所以不確定。
紫外誘變與前體篩選相結合有可能獲得高產紅豆杉細胞株,因為當苯甲酸濃度為0mmol/L時,有新的紅豆杉細胞生長;但是由於隨機性,還沒有得到證實。