將培養液置於500ml三角瓶中，每瓶容量為100ml，加入10 ~ 15個直徑小於0.8cm的小玻璃珠或玻璃碎片，用棉塞和牛皮紙密封，121℃滅菌40min，取出冷卻至28℃接種。每瓶接種小塊傾斜的母種，使氣生菌絲壹面朝上懸浮在液面上，在24 ~ 26℃恒溫下仍培養48小時。當氣生菌絲伸入培養液後，置於往復式搖床上振蕩培養，振蕩頻率為80 ~ 100次/分，振幅(行程)為6 ~ 10cm；如果使用轉盤，偏心距為4 cm，振蕩頻率為150 ~ 220 rpm。由於轉速較高，菌絲球壹般較大，菌絲球表面蓬松菌絲較少，不適合作為菌種使用。因此，壹般轉盤在使用前應適當調整偏心度。搖床溫度控制在24 ~ 26℃，培養時間為72 ~ 96小時。不同種類的食用菌，其搖床培養的技術參數是不同的。灰樹花壹般在25℃，200轉，偏心4厘米。搖瓶3-4天後，培養液呈黃褐色，清澈透明，菌絲球多。顯微鏡下，菌絲球直徑應在1-2 mm內，離心過濾樣品(2500 rpm，15 min)，在105℃幹燥至恒重，稱取菌絲幹重至10g/L..此類菌株可再次接種於三角瓶中，每瓶接種10 ml菌液，繼續擴大搖瓶培養。由於菌絲球處於旺盛生長狀態，分散性好，可以縮短搖瓶培養時間，最快2天即可終止搖瓶培養。如果培養基渾濁，多半是細菌汙染的結果。培養液只有在通過顯微鏡檢查後才能用於生產。搖瓶培養的液體菌種在4℃冰箱中可保存20 ~ 30天，在15 ~ 20℃室溫下可保存5 ~ 7天，對接種成功率和產量無不良影響。
在生產實踐中，也可以用大玻璃瓶制備液體菌種，但必須有效果更好的空氣過濾裝置。
2.菌絲體三級擴大培養的壹級種子罐定容35升，搖瓶種子通過帶閥門的接種管接種，搖瓶種子按5%-7%的比例接種1.5-2升，按發酵工藝培養成熟；壹級種子接種到二級種子罐中，恒量350升，按10%接種35升壹級種子，培養成熟。無論哪種菌種罐，接種前，空罐必須消毒(135 ~ 140℃)1小時，然後註入培養液滅菌。程序是先將夾層預熱至90℃，10分鐘後，放蒸汽進入內層升溫至115℃左右，保溫8分鐘，時間不宜過長，以免破壞營養成分。然後向夾層內註入冷水降溫至26℃後接種。接種時註意打開排氣口，關閉進氣口，將壓力降至0.05 MPa。同時，取樣進行顯微鏡檢查，用肉湯培養基檢查培養液的滅菌情況。0點取樣檢查雜菌，0。d值(光密度)和初始糖；12、24、36和48小時，分別取每個樣品檢查0。d值、殘糖和pH值。正常培養48小時後，pH值降至5.0，凈長為0。d值在0.5左右，耗糖量在壹個單位左右，可以轉移到容積較大的三級培養罐。
三級培養罐容積為10噸，壹般恒定容積為7500升。同時加入培養液和消泡劑(聚氧化丙烯甘油醚)，消泡劑用量為2.5升，占培養液的0.03%。按照10%接種量接種菌種(兩個二級種子罐連接1三級罐)。先倒罐(140℃)1小時，再實際倒罐(115 ~ 118℃)50 ~ 60分鐘，然後降至25℃接種。前培養溫度為25 ~ 26℃，後培養溫度為26 ~ 27℃。pH控制在5.5左右，降低時流加尿素，用量壹般為培養液的0.2%。發酵前期通氣量為1∶05(體積/體積)，中期升溫可將通氣量提高至1∶1，防止pH下降過快。接種後，葉輪轉速為180 rpm，培養72小時後，每12小時取樣，測定糖、氮、pH和雜菌。中間補料可以提高菌絲生長速度，縮短發酵時間，提高細菌濃度。20小時、40小時、60小時都可以補充材料，補充材料的量視具體情況而定。
註意控制培養時間，過早放罐菌絲體產量低，過晚菌絲體會老化自溶。壹般可在三級罐中培養3 ~ 4天。裝罐標準:pH降至5，殘糖2.5左右，氨氮不大於30mg/ml，菌球濃度達到1000 ~ 1500/ml，或3000轉/離心10分鐘後，每100 ml菌泥濕重為20 ~。
應根據真菌的生長要求選擇不同的工藝條件。灰樹花壹般控制溫度在25℃，罐壓0.05 MPa，通氣量(液體:氣體)1: 0.3 ~ 0.5，攪拌轉速200轉/分。
檢查發酵液質量的項目包括:純度檢查，顯微鏡或平板培養未檢出細菌和黴菌；活力檢查:顯微鏡檢查可見菌球邊緣菌絲分枝細密，結晶紫染色時菌絲顏色較深，菌絲原生質無凝集和液泡。培養基靜置5分鐘後，菌泥不沈。80%的菌球直徑小於65438±0毫米。
培養液經板框過濾或連續離心得到菌絲體，幹燥後可直接食用或作為飲料和食品添加劑；還可以提取灰樹花的胞內多糖，將培養液濃縮得到胞外多糖，可作為制備藥物的原料。
含有大量菌絲的培養液可以用來代替母種和栽培種。液體菌種擴繁的菌種具有生長快、活力強、定殖培養快、汙染率低的優點。大規模培養時，可將菌絲體液體註入已滅菌的培養袋和5噸發酵罐中，3天內可生產3.5噸液體菌種。按5%的接種量，500克幹料的培養袋可註入25毫升液體菌種，70噸培養料可接種3.5噸液體菌種，約1.4萬個培養袋。