甘油菌的活化步驟及如何保存甘油菌？

1.LB培養基的制備:準備10g胰蛋白腖、5g酵母膏、10g氯化鈉，加入800ml去離子水，混勻至完全溶解，然後用0.2ml氫氧化鈉(5mol/L)調節ph至7.4，加入1L去離子水，高壓蒸汽滅菌。2.倒置平板:將培養基置於60℃水浴中保溫，取出後輕輕旋轉培養基，使瓊脂均勻分布。

1、甘油菌種活化步驟

1和LB培養基的制備

1.LB培養基的制備:準備10g胰蛋白腖、5g酵母膏、10g氯化鈉，加入800ml去離子水，混勻至完全溶解，然後用0.2ml氫氧化鈉(5mol/L)調節ph至7.4，加入1L去離子水，高壓蒸汽滅菌。2.倒置平板:將培養基置於60℃水浴中保溫，取出後輕輕旋轉培養基，使瓊脂均勻分布。

1、甘油菌種活化步驟

1和LB培養基的制備

(1)準備10g胰蛋白腖、5g酵母膏、10g氯化鈉，然後加入800ml去離子水，攪拌均勻至完全溶解，再用0.2ml氫氧化鈉(5mol/L)調節ph至7.4左右，加入1L去離子水，高壓蒸汽滅菌20分鐘。

(2)高壓滅菌前，應加入15g/L瓊脂糖(用於鋪平板)或7g/L瓊脂糖(用於制備頂層瓊脂糖)。

2.倒置板

(1)超凈臺、接種圈、培養皿、酒精燈等。用紫外線消毒大約30分鐘。

(2)將高壓滅菌後的培養基置於60℃水浴中保溫，待溶液未冷卻時，取出培養基，輕輕旋轉，使瓊脂在培養基溶液中均勻分布。

(3)冷卻至50℃時，在超凈臺中加入抗生素，旋轉並混合均勻培養基，然後將培養基從燒瓶中倒出，鋪平板。

(4)將甘油菌凍存管放在冰上，直接用接種環蘸凍存管內的冰渣，然後用平板包被。

3、大量的文化

(1)將冷藏後的液體培養基再次高溫高壓滅菌，冷卻至50℃時加入抗生素，然後將菌落挑入加入抗生素的液體培養基中(2-5ml)，37℃，200rpm培養8小時左右。

(2)按照1: 500-1000的比例，將加入抗生素的液體LB培養基稀釋成菌液(20-25？l菌液+25ml液體LB培養基，37℃，200rpm培養12-16小時。

二、如何保存甘油菌

1.如果是20%甘油保存的菌種(甘油:菌液= 20: 80)，壹般在零下70℃保存。

2.如果是普通菌株，純化後接種到普通肉湯管中，然後經過4-6小時的增菌後，加入適量的甘油-生理鹽水保存液，在-20℃下保存。如果是鏈球菌和奈瑟菌，純化後接種於血清肉湯管中，在5-10%CO2中富集8-10小時，然後加入適量甘油-生理鹽水保存液，於-80℃保存。如果是真菌菌株，純化後直接取菌洗入肉湯，加入甘油-生理鹽水保存液，零下20℃保存。